第十四章 免疫学检测技术.pptVIP

第三节 免疫酶技术在食品检测中的应用 ELISA 基本原理 ①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。 ②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。 第62页，共101页，编辑于2022年，星期二 第三节 免疫酶技术在食品检测中的应用 ELISA 基本原理 在测定时，把受检酶标抗体或抗原和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅刊物定性或定量分析。 第63页，共101页，编辑于2022年，星期二 第三节 免疫酶技术在食品检测中的应用 ELISA 基本原理 碱 性 磷 酸 酶 或 过 氧 化 物 酶 第64页，共101页，编辑于2022年，星期二 第三节 免疫酶技术在食品检测中的应用 酶联免疫吸附剂测定 enzyme linked immunosorbent assay，ELISA 二、ELISA的种类 P320 直接法测定抗原 间接法测定抗体 双抗体夹心法测定抗原 双抗原夹心法测定抗原 竞争法测定抗原 第65页，共101页，编辑于2022年，星期二 第三节 免疫酶技术在食品检测中的应用 第66页，共101页，编辑于2022年，星期二 第三节 免疫酶技术在食品检测中的应用 二、ELISA的种类 双抗原夹心法测定抗原 第67页，共101页，编辑于2022年，星期二 第三节 免疫酶技术在食品检测中的应用 二、ELISA的种类 双抗体夹心法测定抗原 第68页，共101页，编辑于2022年，星期二 第69页，共101页，编辑于2022年，星期二 第70页，共101页，编辑于2022年，星期二 ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方法中有3种必要的试剂： ①固相的抗原或抗体， ②酶标记的抗原或抗体， ③酶作用的底物。 根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件，可设计出各种不同类型的检测方法。 （一）双抗体夹心法 　 第71页，共101页，编辑于2022年，星期二 单克隆抗体的制备 骨髓瘤细胞 脾脏淋巴细胞 （ HGPRT-TK- ) （HGPRT+TK+） 在HAT中不能生长 体外培养过程中死亡 ↓←PEG 杂交瘤细胞 (HGPRT+、TK+) ↓ 在HAT中大量长期繁殖 ↓ 克隆化 ↓ 产生单抗 第30页，共101页，编辑于2022年，星期二 第一节 免疫学检测技术原理 抗原或抗体检测原理： 抗原抗体的结合具有高度专一性 借助抗原和抗体在体外特异结合后出现的各种现象，对标本中的抗原或抗体进行定性或定量的检测。 第31页，共101页，编辑于2022年，星期二 对抗原或抗体进行定性或定量的检测的原理 Ab excess Ag excess Equivalence – Lattice formation 第32页，共101页，编辑于2022年，星期二 对抗原或抗体进行定性或定量检测的原理 根据抗原抗体形成的免疫复合物的浓度进行定量检测。 P 312 第33页，共101页，编辑于2022年，星期二 第一节 免疫学检测技术原理 可作为抗原进行检查的物质： 微生物及其大分子产物 人和动物细胞 人和动物体内的各种大分子 各种半抗原 第34页，共101页，编辑于2022年，星期二 抗原或抗体检测原理 第35页，共101页，编辑于2022年，星期二 较早的抗原抗体反应检测方法 1、凝集反应 （Agglutination) 2、沉淀反应 (Precipitation) 3、补体结合试验 (Complement fixation test ) 4、中和试验 (Neutralization test) 第36页，共101页，编辑于2022年，星期二 一、凝聚反应(Agglutina