《食品安全快速检测技术》教学课件—03农药残留快速检测.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 适用范围 本方法适用于叶菜、菜花和部分果菜、菜豆等蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的检测。 检测原理 在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶有抑制作用，抑制率与农药的浓度呈正比。本法利用酶催化乙酰胆碱水解，水解产物与显色剂反应生生黄色物质，该物质在412nm处有吸收，测定吸光度随时间的变化值，计算出抑制率，通过抑制率可以判断蔬菜中含有机磷或氨基甲酸酯类农药残留量的情况。 实训二 酶抑制率法测定米面、果蔬中农药残留（分光光度法） 动物酶原： 原理： 乙酰胆碱酯酶 某种底物 乙酸 + 胆碱 ↓5，5-二硫代-双-2-硝基苯甲酸 5，5-二硫代-双-2-硝基苯甲酸（黄色） 在412 nm处有最大吸收，测定其在单位时间内的生成量，即可测得乙酰胆碱酯酶的活性。通过测定乙酰胆碱酯酶(AChE)受抑制的程度来检测有机磷或氨基甲酸酯类农药。 主要仪器 农药残留快速检测仪，电子天平，移液枪及配套管嘴，冰箱，超声波提取仪，恒温水浴。 试剂 ①pH8.0缓冲溶液(提取液)：分别称取11.9g无水磷酸氢二钾和3.2g磷酸二氢钾，溶解于1000mL 蒸馏水中。 ②显色剂：分别称取160mg 二硫代二硝基苯甲酸(DTNB)和15.6mg 碳酸氢钠，溶解于20mL缓冲溶液中，4℃冰箱中保存。 ③底物：称取125mg 碘化硫代丁酰胆碱，溶解于15mL缓冲液中，摇匀后置4℃冰箱中保存备用。保存期不超过两周。 ④丁(或乙)酰胆碱酯酶：根据酶的活性情况，用缓冲液溶解，3min内的吸光度变化控制在0.4-0.8。摇匀后置4℃冰箱中保存备用。 操作步骤 ①样品处理 选取有代表性的蔬菜样品，用干净的毛巾擦干净表面泥土，剪成1cm左右见方碎片，取样品2g，(非叶菜类取2g)放入烧杯或提取瓶中，加入10mL缓冲溶液，手摇振荡1-2min，或超声波振荡5min，浸出提取液，静置3-5min，待用。 ②对照溶液测试 先于试管中加入100?L酶液和100?L显色剂，再加入2.5mL缓冲溶液，摇匀后于37℃放置10min，加入100?L底物摇匀，此时开始反应并显色，要立即放入仪器比色池中，记录反应3min时的吸光值?A0。 ③样品溶液测试 先于试管中加入100?L酶液和100?L显色剂，再加入2.5mL样品提取液，其它操作与对照溶液测试相同，记录反应3min的吸光度变化值?At。 结果计算及判定 结果以酶被抑制的程度(抑制率)表示。 抑制率(%)=[ (?A0-?At)/ ?A0]×100 当蔬菜样品提取液对酶的抑制率≥50%时，表示蔬菜中有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药存在，需要重复检验2次以上确定结果。同时可在实验室进一步确定具体农药品种和含量。 注意事项 ①本方法利用分光光度计即可进行检测，灵敏度高于速测卡法。如果配合农药速测仪，可有效地适应现场快速检测的需要。现在市场上使用的该类仪器品种各式各样，有4通道、5通道、8通道、12通道的，大多是由分光光度计在结果计算功能上进行改进的专用农药残留快速检测仪。该类仪器使用简单方便，直接显现检测结果，配有数据管理软件，检测数据可上传，是目前省市一级对农药残留监督和县区一级日常检测的主要仪器。 ②目前市场上销售和使用的试剂种类较多，如何判断检测试剂好坏、是否适用，到目前为止，还没有一个相关的产品标准。各检测使用单位大多是根据仪器供应商提供或自己比较熟悉的来确定使用哪个品种或哪个国家的检测试剂。事实上，这是一个理解误区，对一个合格的试剂来说，它应适合于任意一款的检测仪器(包括紫外分光光度计)。 ③试剂质量判别法：用5mL的玻璃试管，按试剂的加入顺序和加入量，加入底物，立刻观察溶液颜色变化情况。若试管内溶液颜色立刻变黄，没有一个逐渐的过程，说明底物已经分解，不能再用；若试管内溶液颜色一直都没变化，酶已失效；若试管内溶液颜色逐渐变黄，说明试剂基本正常，具体是否能用，需待使用仪器测其空白样的活性才能确定。一般空白样3 min的变化值为0.4-0.8较为合适。如果空白差值小于0.2，最好不用。空白差值在0.2-0.4，说明酶的活性较低，应当适当加大酶的用量，加大到l00?L，将空白差值调到0.4-0