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《生物产品检验技术》课程单元教学设计卡 一、教案头 课程单元果胶酶活力的测定 授课对象生物技术专业 单元学时 2 授课教师授课地点 授课时间 教 学 目 标 能力（技能）日标 知识目标 素质目标 掌握分光光度法测 定的果胶酶活力的操 作流程； 掌握果胶酶酶液、 底物母液、缓冲液的 配制方法； 掌握分光光度计的 使用方法； 能够精确完成半乳 糖醛酸标准曲线绘 制； 酶活力的计算。 掌握还原法测定果胶 酶活力的原理； 掌握还原法测定果胶 酶活力的方法； 养成认真主动学习的习 惯； 能掌握常用仪器的使用 和保养方法； 养成完成实训后及时整 理实训场所的良好职业 素养； 养成良好的团队合作精 神。 能力训练任务 还原法测定果胶酶活力 教 学 重 占 八、、 与 难 点 重点 难点 分光光度法测定的果胶酶活力 的操作流程； 酶活力的计算方法。 1.半乳糖醛酸标准曲线绘制； 教 学 任务一 1.果胶酶的性质 2.果胶酶的生产流程任务二 还原法测定果胶酶活力的原理还原法测定果胶酶活力的操作流程 还原法测定果胶酶活力的操作要点酶活力的计算 过程设计时间 教 学 设 计 与 组 织 （一）导入新课 通过阐述果胶酶组成、特性、应用，使同学们认识到果胶酶 活力测定的重要性。 组成：含酯酶、水解酶和裂解酶三种成分，分别对果胶质起 解酯、水解、裂解作用，生成半乳糖醛酸和低聚半乳糖醛酸、不 饱和半乳糖醛酸和低聚半乳糖醛酸等。 特性：热稳定性较差，以果胶为底物，60°C保温15min,酶 活力剩余23%O酶作用的最适温度为45?50°C,若低于此温度， 作用时间要相应延长。Fe^ Ca Zn、Sn等离子对酶有抑制作用， 在应用时应注意容器的选择。 应用：果汁澄清、橘子去囊衣、莲子脱内皮、蒜脱皮、中药 成分的提取等。 （二）介绍果胶酶的生产流程斜面培养 种子培养熏珂莓板野和云衣留生产果胶酶工 艺流程 （三）还原法测定罪蠢也喂验原理？ PE、PG和PMG yXJ胶质起解酯作用产生甲醇和果胶酸； 水解作用产生半乳臀醛矗寡聚半乳糖醛酸；裂解作用产生不饱 和醛酸和寡聚半乳 铜离子共热，使其生成蓝色物质。根史呕糖醛酸显色反应确定产物量，表示 酶活力。 压滤炫些产物的醛基在碱性溶液中与两价 化亚铜沉淀。氧化亚铜与砰钳酸反应 沉淀干燥 5min. lOmin （四）材料用具1）材料商品果胶酶。 2）试剂 5min10min（1）甲试剂：称取纯酒石酸钾钠12 g,无水碳酸钠24 g,加 水250 ml,搅匀，向此液中缓慢加入10%硫酸铜溶液40 ml,碳 酸氢钠16 g。另取500 ml热水，加入无水硫酸铜180 g,煮沸驱 逐溶存气体。冷却后，注入1 L容量瓶中，两液混合定容至1 L。 长期存放后，如有少量红色氧化亚铜沉淀，应予以过滤，滤液可 在室温下长期保存。 5min 10min （2）乙试剂：称取钥酸[（NH4）Mo4024 - 4H20]25 g 溶于 450 ml 水中，再缓慢加入浓硫酸21 mlo另取25 ml水，溶解纯结晶碑 酸二钠（Na2HAsO4. 7H20） 3 g（可用碑酸 1.28 g,以 1 mol / L NaOH 19. 24 ml溶解，再加水4. 75 ml代替此液）。然后，充分混合， 在37°C放置24-48 h,溶液逐渐变黄色，移至棕色细口瓶中保存。 （3）100M-g/ml半乳糖醛酸钠溶液：称取半乳糖醛酸钠0. 1 g, 先用少量蒸馅水溶解后，再加水定容至1 000ml。 （4）酶液制备：将酶粉适当稀释，过滤备用，参考实训一。果 实均质后，离心取上清液。稀释备用。 3）器具分析天平、变温电炉、恒温水浴锅、分光光度计、秒表等。 （五）操作流程 lOmin（六）操作要点 lOmin 1.绘制标准曲线 取100ptg/ml半乳糖醛酸钠0.2, 0.4, 0.6, 0. 8, 1. 0 ml,再分别加水至1 mlo向各管加甲液试剂1 ml,置 沸水浴煮沸10 min,冷至不烫手时加乙试剂1 ml,稀释至12. 5 mlo 在波长620 nm处比色。以吸光度值A为纵坐标，半乳糖醛酸钠微 克数为横坐标绘制标准曲线。各管半乳糖醛酸钠含量见下表。 管号 空白 1 2 3 4 5 半乳糖醛酸钠溶液，ml 0 0. 2 0.4 0.6 0. 8 1. 0 甲试剂/ ml 1 1 1 1 1 1 乙试剂/ml 1 1 1 1 1 1 半乳糖醛酸钠/ug 0 20 40 60 80 100 2.酶样测定 取果胶溶液0.5 ml,在50°C水浴中保温3 min平衡后，加稀 释酶液0.5 mlo保温3 min后立即加入甲试剂1 ml,沸水浴煮沸 10 min,冷却，加乙试剂1ml,加水定容至12.5 ml。在波长620 nm处比色。查标准曲线确定0. 5ml稀