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《生物产品检验技术》课程单元教学设计卡
一、教案头
课程单元果胶酶活力的测定
授课对象生物技术专业
单元学时
2
授课教师授课地点
授课时间
教 学 目 标
能力(技能)日标
知识目标
素质目标
掌握分光光度法测 定的果胶酶活力的操 作流程;
掌握果胶酶酶液、 底物母液、缓冲液的 配制方法;
掌握分光光度计的 使用方法;
能够精确完成半乳 糖醛酸标准曲线绘 制;
酶活力的计算。
掌握还原法测定果胶 酶活力的原理;
掌握还原法测定果胶 酶活力的方法;
养成认真主动学习的习 惯;
能掌握常用仪器的使用 和保养方法;
养成完成实训后及时整 理实训场所的良好职业 素养;
养成良好的团队合作精 神。
能力训练任务
还原法测定果胶酶活力
教 学 重 占 八、、 与 难 点
重点
难点
分光光度法测定的果胶酶活力 的操作流程;
酶活力的计算方法。
1.半乳糖醛酸标准曲线绘制;
教 学
任务一
1.果胶酶的性质
2.果胶酶的生产流程任务二
还原法测定果胶酶活力的原理还原法测定果胶酶活力的操作流程
还原法测定果胶酶活力的操作要点酶活力的计算
过程设计时间
教 学 设 计 与 组 织
(一)导入新课
通过阐述果胶酶组成、特性、应用,使同学们认识到果胶酶 活力测定的重要性。
组成:含酯酶、水解酶和裂解酶三种成分,分别对果胶质起 解酯、水解、裂解作用,生成半乳糖醛酸和低聚半乳糖醛酸、不 饱和半乳糖醛酸和低聚半乳糖醛酸等。
特性:热稳定性较差,以果胶为底物,60°C保温15min,酶 活力剩余23%O酶作用的最适温度为45?50°C,若低于此温度, 作用时间要相应延长。Fe^ Ca Zn、Sn等离子对酶有抑制作用, 在应用时应注意容器的选择。
应用:果汁澄清、橘子去囊衣、莲子脱内皮、蒜脱皮、中药 成分的提取等。
(二)介绍果胶酶的生产流程斜面培养
种子培养熏珂莓板野和云衣留生产果胶酶工 艺流程
(三)还原法测定罪蠢也喂验原理?
PE、PG和PMG yXJ胶质起解酯作用产生甲醇和果胶酸; 水解作用产生半乳臀醛矗寡聚半乳糖醛酸;裂解作用产生不饱 和醛酸和寡聚半乳 铜离子共热,使其生成蓝色物质。根史呕糖醛酸显色反应确定产物量,表示 酶活力。
压滤炫些产物的醛基在碱性溶液中与两价 化亚铜沉淀。氧化亚铜与砰钳酸反应
沉淀干燥
5min.
lOmin
(四)材料用具1)材料商品果胶酶。
2)试剂
5min10min(1)甲试剂:称取纯酒石酸钾钠12 g,无水碳酸钠24 g,加 水250 ml,搅匀,向此液中缓慢加入10%硫酸铜溶液40 ml,碳 酸氢钠16 g。另取500 ml热水,加入无水硫酸铜180 g,煮沸驱 逐溶存气体。冷却后,注入1 L容量瓶中,两液混合定容至1 L。 长期存放后,如有少量红色氧化亚铜沉淀,应予以过滤,滤液可 在室温下长期保存。
5min
10min
(2)乙试剂:称取钥酸[(NH4)Mo4024 - 4H20]25 g 溶于 450 ml 水中,再缓慢加入浓硫酸21 mlo另取25 ml水,溶解纯结晶碑 酸二钠(Na2HAsO4. 7H20) 3 g(可用碑酸 1.28 g,以 1 mol / L NaOH 19. 24 ml溶解,再加水4. 75 ml代替此液)。然后,充分混合, 在37°C放置24-48 h,溶液逐渐变黄色,移至棕色细口瓶中保存。
(3)100M-g/ml半乳糖醛酸钠溶液:称取半乳糖醛酸钠0. 1 g, 先用少量蒸馅水溶解后,再加水定容至1 000ml。
(4)酶液制备:将酶粉适当稀释,过滤备用,参考实训一。果 实均质后,离心取上清液。稀释备用。
3)器具分析天平、变温电炉、恒温水浴锅、分光光度计、秒表等。
(五)操作流程
lOmin(六)操作要点
lOmin
1.绘制标准曲线 取100ptg/ml半乳糖醛酸钠0.2, 0.4, 0.6,
0. 8, 1. 0 ml,再分别加水至1 mlo向各管加甲液试剂1 ml,置 沸水浴煮沸10 min,冷至不烫手时加乙试剂1 ml,稀释至12. 5 mlo 在波长620 nm处比色。以吸光度值A为纵坐标,半乳糖醛酸钠微 克数为横坐标绘制标准曲线。各管半乳糖醛酸钠含量见下表。
管号
空白
1
2
3
4
5
半乳糖醛酸钠溶液,ml
0
0. 2
0.4
0.6
0. 8
1. 0
甲试剂/ ml
1
1
1
1
1
1
乙试剂/ml
1
1
1
1
1
1
半乳糖醛酸钠/ug
0
20
40
60
80
100
2.酶样测定
取果胶溶液0.5 ml,在50°C水浴中保温3 min平衡后,加稀 释酶液0.5 mlo保温3 min后立即加入甲试剂1 ml,沸水浴煮沸 10 min,冷却,加乙试剂1ml,加水定容至12.5 ml。在波长620 nm处比色。查标准曲线确定0. 5ml稀
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