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端粒长度检测方法：
实时荧光定量PCR分两局部进行，分别测定端粒和内参基因RPLPO （核糖体大亚基P0 蛋白基因）的Ct值，每次反响需要设定标准曲线。端粒（T）重复拷贝数与单拷贝基因（S） 的比率，即T/S比率可以得出端粒的相对长度，而T/S比率与端粒长度成正比关系。T/S计 算公式如下：
copy gene)]=2-ACTT/S二[2CT(telomeres)/2CT(single1基因组DNA的提取
copy gene)]=2-ACT
1.提取人外周血基因组DNA
以试剂盒提取获得人外周血基因组DNAo2实时荧光定量PCR测定DNA端粒长度
.引物序列
端粒 Tel 1：浓度 675 nmol/L序歹U 5 -GGTTTTTGAGGGTGAGGGTGAGGGTGAGGGTGAGGGT-3,
端粒 Tel 2：浓度 1350 nmol/L序歹U 5 -TCCCGACTATCCCTATCCCTATCCCTATCCCTATCCCTA-3，
RPLPO 基因 hRPLPOl：浓度 800 nmol/L序歹U5 -CCCATTCTATCATCAACGGGTACAA -3,
RPLPO 基因 hRPLP02：浓度 800 nmol/L序歹U 5 -CAGCAAGTGG-GAAGGTGTAATCC -3
.标准曲线制作
选取同一血样基因组DNA为标准品，使用等比稀释，稀释系数为2,浓度范围为： 0.25-64ng/ul,即可稀释得9个浓度梯度,分别为64,32,16,8,421,050.25 ng/H I,制作 的标准曲线R20.98o.反响体系(每个样设置品三个重复)
10 U I反响体系
gDNA10ngMaster Mix (quantiTect SyberGreen PCR kit)Up to 10 U I
注：内参及样品反响体系中，Master Mix除了引物不同外，其余成分均相同另一文献所述的反响体系
25 U I反响体系
SYBR Premix Ex Taq (2X)12.5 u IgDNA1.0 U I (约 60ng/ u I)
端粒 Tell (内参基因 hRPLPOl)0.625 H I (1 U I)
端粒 Tel 2 (内参基因 hRPLP02)2.25 U I (lul)dH2OUpto 25 U I
4. PCR反响条件
95℃ 10 min
95 ℃ 15 sec
54℃ 2 min
54c检测荧光强度，35个循环
72 ℃ lOmin参考文献：
[l]Sonia Garcf a-Calzo^n, Adriana Moleres, Ascensio n Marcos et al. Telomere Length as a Biomarker for Adiposity Changesafter a Multidisciplinary Intervention in Overweight/ Obese Adolescents: The EVAS YON Study⑵吕昆，林丹，许淼等,应用实时荧光定量PCR测定牛体细胞端粒长度
⑶王敏敏，杨浩，文IJ广义等.荧光定量PCR测定端粒长度
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