霉菌试验简明教程-实验部分.docx

霉菌试验培训教程 空军装备环境与可靠性试验中心 实验部分 实验一 霉菌试验室常用的器皿 微生物学实验室所用的玻璃皿，大多要进行消毒、灭菌和用来培养微生物，因此对其质量、洗涤和包装方法均有一定的要求。一般，玻璃器皿的质量要求硬质玻璃，才能承受高温和短暂烧灼而不破损；器皿的游离碱含量要少，否则会影响培养基的酸碱度；对玻璃器皿的形状和包装方法的要求，以能防止污染杂菌为准；洗涤方法不恰当也会影响实验结果。 一、器皿的种类、要求和应用 1.试管 微生物学实验所用的玻璃试管，其管壁必须比化学实验室用的厚些，这样在塞棉花塞时，管口才不会破损。试管的形状要求没有翻口，不然，微生物容易从棉花与管口进入试管而造成污染。棉塞可用棉花塞、试管帽，橡胶塞等。 试管的大小常选用中试管(约 13～15×100～150mm)。2.玻璃吸管(又称移液管) 霉菌试验室一般要准备 1、5、10ml 的刻度玻璃吸管，与化学实验室所用的不同，其刻度指示的容量往往包括管尖的液体体积，亦即使用时要注意将所吸液体吹尽，故有时称为“吹出”吸管。 培养皿 常用的培养皿，皿底直径 90mm，高 15mm。培养皿一般为玻璃皿盖。在培养皿内倒入适量培养基制成平板，用于分离、纯化、鉴定菌种以及微生物计数等。 三角烧瓶与烧杯 三角烧瓶有 100、250、500、1000ml 等不同的大小，常用来盛无菌水、培养基和摇瓶发酵等。常的烧杯有 50、100、250、500、1000ml 等，用来配制培养基和药品。 载玻片与盖玻片 普通载玻片大小为 75×25mm，用于微生物涂片、染色，作形态观察等。盖玻片为 18×18mm。6.双层瓶 由内外两个玻璃瓶组成，内层小锥形瓶盛放香柏油，供油镜头观察微生物时使用，外层瓶盛放二甲苯，用以擦净油镜头。 7.滴瓶 用来装各种染料、生理盐水等。8.接种工具 接种工具有接种环、接种针、接种钩、接种铲、玻璃涂布器等。接种环、针、钩、铲的金属 可用铂或镍，原则是软硬适度，能经受火焰反复烧灼，又易冷却。9.容量瓶 常见的容量瓶有 100、250、500、1000ml 等不同的大小，常用来定容溶液体积。 二、玻璃器皿的清洗方法 清洁的玻璃器皿是实验室得到正确结果的先决条件，因此，玻璃器皿的清洗是实验前的一项重要准备工作。清洗方法根据实验目的、器皿的种类、所盛放的物品、洗涤剂的类别和沾污程度等的不同而有所不同。 新玻璃器皿的洗涤方法 新购置的玻璃器皿含游离碱较多，应在酸溶液内先浸泡数小时。酸溶液一般用 2%的盐酸或洗涤液。浸泡后用自来水冲洗干净。 使用过的玻璃器皿的洗涤方法 试管、培养皿、三角烧瓶、烧杯等可用瓶刷或海绵沾上肥皂或洗衣粉或去污粉等洗涤剂刷洗，然后用自来水充分冲洗干净。玻璃器皿经洗涤后， 内壁的水是均匀分布成一薄层，表示油垢完全冼净，若挂有水珠，则还需要洗涤液浸泡数小时，然后再用自来水充分冲洗。 装有固体培养基的器皿应先将其刮去，然后洗涤。长有霉菌的培养物先行高压蒸汽灭菌，然后将培养物倒去，再进行洗涤。 玻璃吸管 吸过菌体或孢子悬浮液的玻璃吸管使用后应立即投入盛有 2%煤酚皂溶液或 0.25%新洁尔灭消毒液或巴斯消毒液的量筒或标本瓶内，24 小时方可取出冲洗。吸取其它溶液的吸管应立即投入盛有自来水的量筒或标本瓶内，以免干燥后难以洗净。吸管的内壁如果有油垢， 同样应先在洗涤液内浸泡数小时，然后再行冲洗。 载玻片与盖玻片 用过的载玻片与盖玻片如滴有香柏油，要先用皱纹纸擦去或浸在二甲苯内摇晃几次，使油垢溶解，再在肥皂水中煮沸 5～10 分钟，用软布或脱脂棉花擦轼，立即用自来水冲洗，然后在稀洗涤液中浸泡 0.5～2 小时，自来水冲去洗涤液，最后用蒸馏水换洗数次，待干后浸于 95%酒精中保存备用。使用时在火焰上烧去酒精。用此法洗涤和保存的载玻片和盖玻片清洁透亮，没有水珠。 检查过活菌的载玻片和盖玻片应先用 2%煤酚皂溶液或 0.25%新洁尔灭消毒液浸泡 24 小时， 然后按上述方法洗涤与保存。 洗涤液的配制与使用 （1）洗涤液的配制 洗涤液分浓溶液与稀溶液两种，配方如下： 浓溶液：重铬酸钠或重铬酸钾(工业用) 50g 自来水 150ml 浓硫酸(工业用) 800ml 稀溶液：重铬酸钠或重铬酸钾(工业用) 50g 自来水 850ml 浓硫酸(工业用) 100ml 配法都是将重铬酸钠或重铬酸钾先溶解于自来水中，可慢慢加温，使溶解，冷却后徐徐加入浓硫酸，边加边搅动。配好后洗涤液呈棕红色或桔红色，长期使用后变成墨绿色即为失效。贮存 于有盖容器内。使用时注意安全。 三、玻璃器皿的包装 略。 实验二 消毒与灭菌 灭菌与消毒是有区别的。灭菌是指杀灭一切微生物的营养体、芽孢和孢子。消毒一般是指消灭病原菌和有害微生物的营养体。灭菌与消毒的方法很多，一般可分为加热、过滤、照射和使用