登革病毒快速检测技术介绍与应用课件-登革热及其实验室诊断.ppt

我国目前登革热诊断试剂的使用 一、检测NS1抗原的快速诊断方法 免疫层析(ICT) ELISA 二、检测病毒核酸的快速诊断方法 荧光定量RT-PCR 需要开展的工作 一、采集标本，建立样品盘，评价各种诊断试剂 二、开展非血标本检测研究，建立并优化尿中病毒RNA和NS1的检测；唾液中RNA、NS1和IgA的检测 三、其他黄病毒，特别乙脑病毒感染对登革热诊断的影响及解决方法 四、可靠的二次感染诊断方法 谢谢！ 登革热发病时间和实验室检测 * * * * 登革病毒感染的抗体检测 一、特异性诊断 IgM、IgG、IgA 二、流行病学调查 IgG 三、鉴别首次和二次感染 和其他黄病毒交叉反应 登革抗体检测方法 检测IgM MacELISA、免疫层析(ICT) 检测IgG 间接法ELISA、GacELISA、IFA、 免疫层析(ICT) 中和试验 特异性高，可以用于分型 乙脑、黄热和登革热的抗体交叉反应 登革病人血清和乙脑交叉反应 登革病毒感染后的黄热和登革抗体 黄热病毒中和抗体和登革病毒抗体 YF PRNT 80% 减少 DV抗体用捕获法化学发光 接种17D疫苗后黄热和登革抗体 唾液中检测登革抗体 检测登革病毒IgM抗体的试剂比较 检测方法比较 3种登革病毒检测方法初步评价 检测试剂： 1、实时定量RT-PCR分型检测方法（本实验室建立）； 2、胶体金法NS1抗原快速检测试剂（CTK Biotech）； 3、酶联免疫ELISA NS1抗原检测试剂（万泰） 临床样本： 2013年西双版纳3型登革热疫情暴发时采集的180份登革热疑似患者急性期血清。 检测方法 样本数（n=180） 阳性检出率(%) （95%CI) 阳性标本数 阴性标本数 qRT-PCR分型检测法 129 50 72.1（65.4-78.7） 胶体金检测NS1抗原 90 90 50.0（42.6-57.4） ELISA法检测NS1抗原 121 59 67.2（60.3-74.2） 实时定量RT-PCR ≈NS1-ELISANS1-胶体金 登革热检测方法比较 诊断方法 优点 缺点 病毒分离和鉴定 确诊 发病5天内标本 特异 耗时至少1周 可分型 不能鉴别初次和再次感染 需要相应技术和设备 RNA检测 确诊 可能由于污染造成假阳性 敏感、特异 发病5天内标本阳性率高 可区分血清型和基因型 不能鉴别初次和再次感染 需要相应技术设备 抗原检测 确诊 敏感性低于RNA检测 价廉、操作简便 抗体检测 IgG或IgM阳转 确诊 再次感染IgM滴度低 价廉、操作简便 需多份血清标本 可能鉴别初次或再次感染 IgM(单份标本) 鉴别可能病例 再次感染IgM滴度低 　 监测、干预评价 　 血清、尿液和唾液中检测NS1和RNA 血清、尿液和唾液中检测NS1和RNA 尿液中检测登革病毒 样本类型 Real-time PCR 登革病毒 基孔肯亚及汉坦病毒 尿液 阳性 阴性 第一次血清 阳性 阴性 第二次血清 阴性 阴性 阳性尿样通过超速离心后扩增 出II型登革病毒全基因组序列 登革热病人不同样品的核酸检测比较（中国检验检疫科学研究院卫生研究所 胡孔新等 ） 登革热确诊患者，连续采样， real-time PCR 检测登革病毒核酸 血样（6ml） 尿样（50ml） 唾液样（5ml） 样本类型 急性期 （0-5天） 极期 （6-10天） 恢复期 （11-15天） 恢复期 （16-20天） 总计 血液 21/22(95.45%) 39/76(51.32%) 3/26(11.54%) 2/6(33.33%) 65/130(50.00%) 尿液 13/17 (76.47%) 49/51(96,08%) 23/26(88.46%) 4/4(100%) 89/98(90.82%) 唾液 8/11(72.75%) 13/31(41.49%) 0/16(0.00%) 1/3(33.33%) 22/61(36.07%) 总计 42/50(84.00%) 101/158(63.92%) 26/68(38.24%) 7/13(53.85%) 176/289(60.90%) 登革热病人不同样品的核酸检测比较 NS1+prM IgM检测 用NS1+prM IgM区别登革和乙脑 JEV MacELISA DV MacELISA DV NS1+prM IgM 联合使用不同检测方法 联合使用检测方法 检测方法A 检测方法B 检测方法A 检测方法B 1、“并联”使用 2、“串联”使用 登革病毒感染与检测 7 0 7 14 21