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自动生化分析仪参数设置技巧 随着检验医学的发展，自动化仪器在一些大中小医院都得到了进一步使用，尤其是自动生化分析仪基本普及到了乡镇卫生院一级，正确 设置参数是使用好仪器得出可靠结果的重要环节，下面就自动生化分析仪参数设置的技巧谈一点看法。 1、基本原理及主要参数：了解生化分析仪基本参数的原理，有利于仪器、试剂的正确使用，有助于正确分析和处理测定数据。生化分析 仪根据自动化程度分半自动和全自动，从目前试剂盒供应情况来看，主要的测定方法为：终点法（包括一点终点法和两点终点法）、速 率法（连续检测法）、速率两点法（两点法），后两种统称动力学法。在生化分析仪上重要参数有：方法类型、测定波长、测定温度、 样本体积分数、吸液量、延迟时间、监测时间、标准浓度、K 值、试剂吸光度上下限等。这些主要参数设置正确是保证结果准确的首要 问题。 2、主要参数设置的技巧： 2.1 方法类型：可根据试剂盒要求或反应原理来设置。对于半自动生化分析仪终点法只是一点终点法，全自动生化仪单试剂选择一点终点 法，而双试剂选择两点终点法。大多数酶学测定使用速率法，尿素氮、肌酐测定等用两点法。 2.2 测定波长：测定波长选择有三个主要条件：(1)待测物质在该波长下的光吸收最大。(2)其吸收峰宜较宽而钝， (3)常见干扰物在该波长 下的光吸收最小。试剂盒说明一般已提供波长参数。有些仪器波长选择受滤光片数量限制，应该就近选择为原则。 2.3 测定温度：一般全自动生化仪都是37 ℃，而半自动生化仪有室温、25℃、30 ℃、37℃等，终点法由于反应在机外进行，选择室温可 以减少仪器温度调整时间，提高工作效率，而速率法和两点法都选择37 ℃比较合适。 2.4 样本体积分数：样品体积分数即样品体积与反应液总体积的比值(SV ／TV) 。酶活力测定中，样品在总体积中的比例应在 10％以下。 一般来说 ，待测物质在样品中含量低的、生理波动范围大的，样品用量较大。如 Trinder 反应测定血清葡萄糖、胆固醇等，样品试剂比 例多为1：100，测定血尿酸或高密度脂蛋白胆固醇，常增加为 1：50 ；ALT 和AST 的样品试剂比例多为1：10 至1：20 。方法灵敏、吸 光度高的实验方法，样品试剂比例小,如白蛋白BCG 法，样品试剂比例常为 1：200 。肌酐Jaff 氏法监测时间短、吸光度值较低，样品试 剂比例多为1：10。一般应以试剂说明为准，不宜轻易改动。可根据最终反应液的量来计算样本量和试剂量。 2.5 吸液量：主要是针对流动比色的全自动或半自动仪器的参数，原则是吸入量不得大于或等于反应液总体积，否则会导致吸空形成比色 池气泡，最好留 100~200μl的余地。 2.6 延迟时间：延迟时间(Delay Time)指试剂与样品混合后到监测开始之间的时间。延迟时间的选择取决于被测物质的浓度（酶的活性） 大小、反应速度的快慢、酶促反应的级数、样品中干扰物消除所需的时间等。比如：CHE 活性高仅需20~30 秒，LDH 一级反应需30~40 秒，ALT 需40~60 秒，AST 需60~75 秒，CK 需90~120 秒。半自动生化仪上酶活性连续监测法的延迟时间设定, 由于只能单份样品逐一 测定，若延迟时问全部设置在仪器内，每个延迟时间加监测时间至少 1分钟以上，守候时间较长。工作量大时，可以根据仪器控温、加 样及读数和试剂特点，以及室温情况，将延迟时问挪一部分到机外，套式操作，但要确保机内延迟时间不要进入线性反应期。兼顾延迟 时间和监测时间反应时间是有限制的。在速率法和两点法中，延长延迟时间必然缩短线性监测期，减少测定的线性范围，也易发生底物 耗尽。 2.7监测时间：酶促反应延迟期后，在过量底物的存在下，反应速率加快并达到一个反应速率稳定的阶段，即酶促反应以恒定的速率进行， 不受底物浓度的影响，这段时间称为线性反应期或零级反应期，自动化生化分析仪的监测时间即为此期。测酶的连续监测法至少 90-120s 或至少4点（3个ΔA ），少于3个ΔA 不能称为连续监测法，因为不能计算线性度。监测时间过长则容易发生底物耗尽，可测范围变窄。 2.8 标准液浓度：终点法和两点法必须设置标准，选择合格的标准品很重要。有些试剂盒配有标准液，但是部分项目标准液定标偏差太大， 我们使用的是干粉复合罗氏校准液，复溶后分装冷冻保存，只要复溶的水质保证，避免反复冻融，校准的结果还是很满意的。注意校准 液靶值获得的方法学，方法不同耙值是有差异的，比较典型的是 ALP测定有IFCC和DGKC法，差异比较大，不可简单套用。 2.9 K值：速率法测定无需带标准或做标准曲线，首先确定样本