肾功能及早期肾损伤检验.ppt

肾脏疾病的生物化学变化 急性肾小球肾炎：少尿、血尿、蛋白尿、高血压、水肿、GFR降低 肾病综合征：大量蛋白尿、低清蛋白血症、高脂血症和严重水肿 急性肾衰竭：电解质和酸碱平衡引起氮质血症、高血钾、代谢性酸中毒等 糖尿病性肾病：持续性蛋白尿；尿微量清蛋白 肾小管性酸中毒：肾小管泌H+和重吸收HCO3-功能障碍，临床出现代谢性 高氯性酸中毒，电解质紊乱 慢性肾衰竭和尿毒症：含氮代谢废物潴留，水、电解质和酸碱平衡失调 知识小总结 酶偶联反应： H2O2 （Trinder反应）, NADH 双试剂 内源性、外源性干扰物 双波长检测 ．．．．．． 课终考核方式 1.每人查找１篇2010年以后发表的关于临床检验方法评价相关的英文学术研究文章(非综述)，结合本课程所学知识独立完成一篇2000-3000字左右的读书报告。 2. 采用统一封面、格式，每人要订成一册，顺序为：封面、读书报告、英文文章的原文。 3. 成绩占课程考核总成绩的60%。 * 肾脏为成对略成蚕豆形的实质性 * * 正常原尿中除不含大分子的蛋白质和血细胞外，其渗透压、pH和溶质成分与血液大致相同。 原尿中含尿素、葡萄糖、微量小分子蛋白质、无机盐和水，而尿液是原尿经过肾脏重吸收后产生，一般情况不含蛋白质、葡萄糖，无机盐和水的含量较少，尿素含量与原尿一样 。 （一） 肌氨酸氧化酶法 原理： 肌酐+H2O 肌酸 肌酸+H2O 肌氨酸 + 尿素 肌氨酸+O2 甘氨酸 + 甲醛 + H2O2 H2O2 +4-氨基氨替吡啉 + 色原物质 有色化合物 + H2O 肌酐酶 肌酸酶 肌氨酸氧化酶 过氧化物酶 Trinder 反应 方法学评价：如何评价？干扰因素？解决办法？ 肌酐的酶法分析是解决肌酐测定中非特异性干扰的根本途径。 利用双试剂法消除内源性肌酸的影响。 Trinder反应中不同显色物质的灵敏度差异很大，胆红素和Vc的干扰可通过添加亚铁氰化钾和抗坏血酸消除或减低。 肝素等抗凝剂在常规用量下对本测定无干扰。 （二） 苦味酸速率法 肌酐与苦味酸盐碱性溶液反应，生成橘红色的苦味酸肌酐复合物，该反应称为苦味酸反应（Jaffe反应），利用速率法排除干扰。 原理： 肌酐+苦味酸 橘红色化合物（510nm） OH- 方法学评价：最常用的方法,简便、快速不需去蛋白，但是特异性差 1. 假肌酐：一些与碱性苦味酸生成红色的物质 维生素C、丙酮、乙酰乙酸、α-酮酸、胆红素、葡萄糖、蛋白质以及头孢菌素类抗生素、强心甙、甲基多巴等 快速反应 20s 慢速反应 80-100s 2.线性范围： 2000 ??mol/L。 3.IFCC推荐方法，双波长(510nm, 600nm)监测。 25-60S 关于双波长检测 目前许多生化测定都采用双波长检测，待测物吸收峰对应的波长为主波长(?1)，另一个称为次波长(?2)。?1/?2的选择原则主要有三种模式： 主次波长选择模式1示意图 吸光度 (1) ?1取吸收峰对应的波长，而取其吸收光谱曲线的“波谷”对应的波长为?2，这样的主次波长间的光吸收差值最大，使测定灵敏度提高。 (2) ?1仍是待测物的吸收峰，但?2取等吸收点对应的波长，如图所示，等吸收点是系列不同浓度待测物的吸收光谱曲线有一交汇点，此点对应的吸光度与浓度无关。此波长选作?2可使待测物浓度只决定于?1处的吸光度高低。 主次波长选择模式2示意图 吸光度 (3) 反应中显色产物的吸收峰对应的波长为?1，而试剂空白(显色剂)的吸收峰对应的波长为?2。这样，在反应液中代谢物浓度越大，剩余的显色剂量越小，使?1与?2对应的吸光度差距拉大，从而提高了灵敏度。 吸光度 主次波长选择模式3示意图 反应前吸收曲线 反应后吸收曲线 参考范围： 肌酐酶法： 男性：59～104μmol/L；女性：45～84μmol/L 苦味酸速率法： 男性：62～115μmol/L；女性：53～97μmol/L 临床意义： 1.血肌酐测定对中晚期肾疾病的临床意义较大。 肾疾病初期血清肌酐值通常不升高，GFR1/