电化学发光免疫分析法.pptVIP

ECLI原理 在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应，用电化学发光剂三联吡啶钌[Ru(bpy)3]2+标记Ab，通过Ag-Ab反应和磁珠分离技术，根据三联吡啶钌在电极上发出的光强度对待测的Ag或Ab进行定量/定性。 第29页，共42页，编辑于2022年，星期四 ECLIA检测流程图一（双抗体夹心的形成） 第30页，共42页，编辑于2022年，星期四 ECLIA检测流程图二 （生物素与亲和素结合） 第31页，共42页，编辑于2022年，星期四 ECLIA体系结构图 第32页，共42页，编辑于2022年，星期四 ECLIA检测流程图三 （磁珠吸引吸附于电极表面） 第33页，共42页，编辑于2022年，星期四 ECLIA检测流程图四 （电极充电启动电化学反应） 第34页，共42页，编辑于2022年，星期四 ECLIA检测流程图五 （撤消磁场冲洗磁珠） 第35页，共42页，编辑于2022年，星期四 方法评价 采用的固相载体是带有磁性的直径约2.8 μm的聚苯乙烯微粒。其特点是反应面积比板式扩大20－30倍，吸附效率高；在液体中形成均匀的悬液，参与反应时类似液相，反应速度大大加快； 第36页，共42页，编辑于2022年，星期四 方法评价 “链霉亲和素-生物素”是是具有很强的非共价相互作用的一对化合物，具有牢固而特异的结合，应用此放大系统，使检测的灵敏度大大提高； 第37页，共42页，编辑于2022年，星期四 方法评价 利用氧化铁的磁性，使用电磁场分离结合态和游离态，方便迅速，实现了精确的全自动化； 标记物的再循环利用，使发光时间更长、强度更高、易于测定。 第38页，共42页，编辑于2022年，星期四 ELIA优越性 高度敏感，可达pg／ml或pmol水平； 特异性强，重复性好，CV＜5％。 测定范围宽，可达7个数量级。 试剂稳定，无毒害，无污染，有效期长，达数月甚至数年。 操作简单，耗时短，易于自动化。 在对环保很重视的国家，CLIA成了取代RIA的首选方法。 第39页，共42页，编辑于2022年，星期四 临床应用 激素 肿瘤标记物 内分泌功能 传染性疾病 其它 如VB12、叶酸、铁蛋白、肌钙蛋白、肌红蛋白、酶、脂肪酸、维生素和药物等多种检测项目。 第40页，共42页，编辑于2022年，星期四 第41页，共42页，编辑于2022年，星期四 谢谢！ 第42页，共42页，编辑于2022年，星期四 常用的标记物包括荧光素、酶和放射性核素等，用这3种标记物进行标记的免疫检测技术被称为3大免疫标记技术。 我国放射免疫分析法有很高的灵敏度，但存在着放射性防护和同位素污染等问题。 生物发光和化学发光是自然界中一种普遍现象。 一种物质由电子激发态回复到基态时，释放出的能量表现为光的发射。 化学发光的物质有两种能态，即基态和激发态，前者能级低后者能级很高，一般地说在激发态时分子有很高并且不稳定的能量，它们很容易释放能量重新回到基态，当能量以光子形式释放时，我们就看到了生物发光。 化学发光技术是近二、三十年来发展起来的一种测定方式 因此，如同RIA、FIA等一样利用免疫反应的特异性和化学发光本身的信号特异性形成了化学发光免疫测定（CLIA）技术。 CLIA是继酶免技术（EIA）、放免技术（RIA）、荧光免疫技术（FIA）和时间分辨荧光免疫技术（TRFIA）之后发展的一项新兴测定技术。 微粒子化学发光免疫分析（ECIA） 也是一种酶免疫分析，用磁珠作为固相载体，增加反应体积和分离效率。标记的酶多为ALP。 化学发光酶免疫分析（CLEIA） 以催化反应的酶为标记物，抗原抗体结合后，其中的酶可对发光体系产生催化作用，产生发光效应。发光信号与抗原抗体的量成正比。多用的发光体系是HRP-鲁米诺。 化学发光免疫分析（CLIA） 是一种用发光剂直接标记抗体的一类免疫分析法，用来标记的发光物必须能参与发光反应、标记和偶联后能稳定、理化性质和免疫特性不改变，多用吖啶酯类和苯酚类化合物。 它是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应，实际上包括了电化学和化学发光二个过程。 它如同酶免疫测定中的底物， 配入缓冲液中， 是ECLI反应中的电子供体。 发光剂 [Ru(bpy)3]2+和电子供体TPA在阳极表面可同时各失去一个电子而发生氧化反应，使二价的[Ru(bpy)3]2+被氧化成三价，后者是一种强氧化剂；另一方面，TPA 被氧化成阳离子自由基TPA+●，后者很不稳定，可自发失去一个质子（H+），形成自由基TPA●，这是一种很强的还原剂，可将一个电子给三价的[Ru(bpy)3]3+，使其形成激发态的[Ru(bpy)3]2+，而TPA自身被氧化成二丙胺和丙醛。激发态的[Ru(b