中药化学 第七单元 色谱操作.ppt

流速： 过快不能达到平衡 过慢色带扩散 最佳流速： 1V0 / 0.5~1h V0=流动相在色谱柱内所占体积 一般为上柱硅胶量的1.5倍;松的为2倍，紧的为1.2倍 * . 流份收集体积： 过小— 增加工作量 过大—人为混合 一般流份体积: 1流份= V0 1 / 10 * . 预测被分离物质的洗脱体积 V保 = V0 / Rf 式: V0 =流动相在色谱柱内所占体积 V保 =保留体积(被分离物质的洗脱体积) 若Rf=0.1, 则 V保 = 10 V0 若Rf=0.2, 则 V保 = 5 V0 若Rf=0.3, 则 V保 = 3.3 V0 * . 一般连续洗脱(柱色谱)的条件: 以TLC的 Rf=0.1~0.3条件为佳 先用单一溶剂, 若Rf值过大,则降低溶剂极性 若Rf值过小,则增加溶剂极性 若单一溶剂不能使Rf值=0.1~0.3,则用混合溶剂 一种溶剂 Rf=0 另一种溶剂 Rf=1 混合使 Rf=0.1~0.3. 若斑点较多,则选适当溶剂,使第一斑点展出,而其它斑点留在原点。 * . 梯度洗脱起步溶剂的确定: 极性小于洗脱剂, 一般为洗脱剂中极性小组分的2倍 例: CHCL3 : MeOH=10:1 ; 5:1 ; 2.5:1 ; 1:1 起步溶剂= 20:1 * . 检测时,点样的物质有: 待分离物质(总样); 标准物质(对照品); 柱洗脱下来的各个流分 * . 溶剂的重复使用： a．若洗脱液为单一溶媒，则采用蒸馏法回收溶媒后，进行循环使用。 b．若洗脱液为混合溶媒，应先回收溶媒，再进行调节密度。如；三元系统的洗脱溶媒CHCI3—MeOH—H2O= 6：4：2，新配制时d = 1.064, 回收溶媒后，用MeOH、H2O调节密度，再用TLC检查，与原斑点Rf值相同即可。 * . 吸附剂的再生 用过的吸附剂经适当方法处理后，可以重复使用。 A．氧化铝 色谱分离后，除去氧化铝柱上端含聚合物及带有深颜色的氧化铝，用甲醇、稀醋酸、氢氧化钠溶液及水洗涤，再经高温活化后，可重复使用、。为了使吸附在氧化铝表面的有机物分解，高温活化时间可适当延长。活化后，氧化铝的颜色比使用后的稍淡，一般来说，氧化铝可重复使用多次，重复次数随色谱过程中有机物污染的程度而定。 * . B．硅胶 由于硅胶对杂质及色素吸附力差，因此回收操作比氧化铝简单。一般可用乙醇或甲醇洗涤，或于索氏提取器中连续抽提除去杂质，洗净的硅胶待溶剂挥发除去后，烘干活化处理即可使用。硅胶的再生也可用5—10倍体积，质量浓度为1％的氢氧化钠煮沸0.5h如仍不呈强碱性(以酚酞作指示剂)，可追加适量质量浓度为1％的氢氧化钠，趁热过滤，以蒸馏水洗3次，再以36倍5％盐酸煮沸0.5h，以蒸馏水洗至中性，120℃活化，过筛即得。 * . C．聚酰胺 用过的聚酰胺粉，一般用5％氢氧化钠洗涤，洗到氢氧化钠液颜色极淡为止。有时因某些鞣质与聚酰胺有不可逆吸附，用氢氧化钠很难洗脱时，可用质量浓度为5％的氢氧化钠在柱中浸泡。每天将柱中的氢氧化钠液放出一次，并加入新的氢氧化钠液浸泡，这样浸泡洗涤一周后，鞣质可基本洗完。然后用蒸馏水洗至pH8～9，再以2倍量10％醋酸洗，最后以蒸馏水洗至中性，即可重复使用。 D．活性炭 用过的活性炭可以用酸碱处理回收。因活性炭来源较易，价格便宜，一般不回收使用。 * . 薄层色谱法 优点： ①所使用的固定相是一次性的，因此样品的预处理比较简单； ②被分离物质的性质没有限制，应用范围广 ③固定相特别是流动相选择范围宽：有利于不同性质化合物的分离；在同一薄层板上可根据被分离化合物的性质选择不同显色剂或检测方法进行定性或定量分析。 ④直观性，且随化学成分及显色方法的不同，斑点显色的颜色丰富多彩，有利鉴别。 * . * . * . 制板 板 类型: 软板----不含黏合剂 硬板-----含黏合剂的 前者系将吸附剂或载体直接在玻璃板上用干法涂成均匀的薄层，但软板疏松，操作很不方便，目前很少使用。 制备含黏合剂的硬板，必须先要制备固定相的匀浆，它