靶向Slug基因表达对体外胰腺癌细胞生物行为的影响.docxVIP

靶向Slug基因表达对体外胰腺癌细胞生物行为的影响 　　【摘要】slug基因在多种恶性肿瘤中存在明显上调,slug上调的肿瘤容易出现远处转移、较深的肿瘤浸润深度和较差的预后[1-2]。后来发现[3]slug既能下调肿瘤细胞内e-cadherin表达,又能上调细胞内vegf蛋白表达,因此,slug与恶性肿瘤转移和血管生成有关。hotz等[4]新近发现,胰腺癌组织及高转移潜能的胰腺癌细胞株存在slug的明显上调。 　　【关键词】slug基因;胰腺癌;影响targettosluggeneexpressiontovitropancreaticglandcancercellbiologybehaviorinfluence 　　wangximan1zhuangkelin2liuyifei2etal. 　　【abstract】thesluggenehastheobviousupwardinmanykindsofmalignanttumors,theslugupwardtumoreasytopresentthedistantplaceshift,thedeeptumorinfiltrationdepthandbadprognosis[1-2].afterwarddiscovered[3]slugbothtobeabletodeclineinthetumourcelle-cadherintoexpress,andcouldsurrendertothestateinthecellthevegfproteintoexpress,therefore,slugandthemalignanttumorshiftandthebloodvesselproductionconcerned.hotzandsoon[4]recentlydiscoveredthatthecancerofthepancreasorganizationandthehighshiftpotential’scancerofthepancreascelllinehasslugtheobviousupward. 　　【keywords】sluggene;cancerofthepancreas;influence 　　【中图分类号】r776.1【文献标识码】b【文章编号】1002-574x(201009-0019-02 　　slug基因在多种恶性肿瘤中存在明显上调,slug上调的肿瘤容易出现远处转移、较深的肿瘤浸润深度和较差的预后[1-2]。后来发现[3]slug既能下调肿瘤细胞内e-cadherin表达,又能上调细胞内vegf蛋白表达,因此,slug与恶性肿瘤转移和血管生成有关。hotz等[4]新近发现,胰腺癌组织及高转移潜能的胰腺癌细胞株存在slug的明显上调。我们推测,干扰slug能抗胰腺癌转移作用。 　　基于上述理论,本课题旨在研究slug干扰对胰腺癌侵袭转移和血管生成的影响,为抗胰腺癌转移提供新的基因靶点。 　　1材料和方法 　　1.1材料 　　1.1.1试剂:rpmi1640购于hyclon公司,小牛血清购于杭州四季青公司,胰酶为国产。质粒提取试剂盒购于axygen,连接试剂盒rna提取试剂、cdna合成及pcr扩增试剂,g3pdh购于takara;质粒提取试剂盒购于axygen,millicell(小室)由millipore公司生产,matrigel和6孔板购于美国bd公司。slug-shrna-1和shrna-1质粒由海口市人民医院王齐全教授惠送,兔抗人多克隆抗体slug购于santacrauz公司。 　　1.1.2细胞株和裸鼠:aspc-1胰腺癌细胞株购于中国科学院上海生物研究所细胞库,细胞用含10%胎牛血清的rpmr1640培养基培养,细胞培养条件为37°c恒温,饱和湿度和5%co2,指数生长的细胞为实验对象。取4周龄健康纯种balb/c-nu/nu雌性裸鼠,体重18～22g,在海南医学院动物实验中心spf级饲养,称重,编号。实验对象共分为三组:阴性对照组,空白对照组和实验组。 　　1.2方法 　　1.2.1基因转染及稳定表达细胞株的筛选:aspc-1细胞在含有10%小牛血清的dmem培养基中,37℃、5%co2条件下培养。用0.25%的胰酶消化细胞后,按每孔4×104个细胞均匀加入96孔板中,培养至细胞85%～90%汇合后,分别转染pslug-sirna和pneg-sirna质粒,具体操作按照脂质体转染试剂lipofectamine2000说明书进行。转染24h后将细胞以1∶10比例传代,次日开始用含有500μg/mlg418的培养基进行筛选培养,每3d更换一次培