复合肥料中多肽含量的测定.pdfVIP

T/CPFIA XXXX—XXXX BA 附 录 A （规范性附录） 复合肥料中多肽含量的测定 A.1 原理 试样用IEC氨基酸分析法测定游离氨基酸总含量。 试样用三氯乙酸预处理，去除沉淀大分子蛋白质，提取多肽氨基酸和游离氨基酸，用盐酸溶液全部 水解，用IEC氨基酸分析法测定酸溶蛋白含量。 多肽即为酸溶蛋白含量与游离氨基酸总含量的差值。 A.2 试剂 实验用水应符合GB/T 6682中一级用水的规格。使用试剂除特殊规定外，均为分析纯。 A.2.1 柠檬酸钠（Na C H O ·2HO）。 3 6 5 7 2 A.2.2 盐酸（优级纯）。 A.2.3 乙二胺四乙酸二钠溶液：10g/L。 A.2.4 盐酸水解溶液（6mol/L）：将500mL盐酸（A.2.2）与500mL水混合，加1g苯酚，混匀。 A.2.5 三氯乙酸溶液（150g/L）：称取150g三氯乙酸，加水溶解并定容至1000mL，混匀。 + A.2.6 柠檬酸钠缓冲液[pH=2.2，c （Na ）=0.2mol/L]：称取19.6g柠檬酸钠（A.2.1），用水溶解并转 移至1000mL容量瓶中，加入16.5mL盐酸（A.2.2），硫二甘醇5.0mL，苯酚1g，用水定容并过滤。 A.2.7 氨基酸标准储备溶液：含天冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、胱 氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、组氨酸和精氨酸共17种氨 基酸，各组分浓度均为2.5 μmol/mL，应使用有证标准溶液。 A.2.8 氨基酸标准工作溶液：准确移取2mL的氨基酸标准储备溶液（A.2.6）置于50mL容量瓶中，以柠 檬酸钠缓冲溶液（A.2.5）定容，各氨基酸组分浓度为100nmol/mL，用安瓿分装密封，每支约1mL，在2℃ ~8℃下保存，有效期3个月。 A.2.9 不同pH值和离子强度的柠檬酸钠缓冲溶液与茚三酮溶液：按照仪器说明书配制或购买。 A.2.10 液氮。 A.3 仪器与设备 A.3.1 天平：感量0.1mg和0.01mg。 A.3.2 氨基酸自动分析仪：具备阳离子交换柱、茚三酮柱后衍生装置及570nm和440nm光度检测器。 A.3.3 离心机：转速不低于4000r/min。 8 T/CPFIA XXXX—XXXX A.3.4 真空泵。 A.3.5 喷灯。 A.3.6 恒温干燥箱：温度可达110℃±2℃。 3 A.3.7 旋转蒸发器或浓缩器：可在室温至65℃间调温，控温精度±1℃，真空度可低至3.3×10Pa (25m mHg)。 A.4 操作步骤 A.4.1 试样的制备 固体样品经多次缩分后，取出约100g，将其迅速研磨至全部通过0.25mm孔径筛，混合均匀，置于洁 净、干燥容器中。 A.4.2 试样溶液的制备 称取试样5g，精确至1mg，置于250mL具塞三角瓶中。在10℃~35℃条件下，准确加入100mL三氯乙酸 溶液（A.2.5）（如样品形成小球或者团块，先均质后再振荡提取）。对于固态试样，摇匀后，于150r/min 振荡30min。将上层溶液倒入100mL离心管中，4000r/min离心5min,上清液为试样提取液。如上层溶液有 漂浮物，需过滤。 称上述取试样提取液0.5mL~5mL （精确至0.1mg），置于20mL安瓿或水解管中，加适量水至溶液总体 积为5mL，再加入10mL盐酸水解溶液（A.2.4），置液氮（A.2.10）中冷冻，使用真空泵抽真空至7Pa （≤ 5×10-2mmHg）后用喷灯封口或充氮气1min后旋紧管盖。将安瓿或水解管放在110℃±2℃恒温干燥箱中， 水解22h~24h。冷却，混匀，开管，过滤，用移液管精确吸取适量的滤液，置于旋转蒸发器或浓缩器中， 60℃下抽真空蒸发至干，必要时，加少许水，重复蒸干1次~2次。加入3mL~