srdna基因的pcr扩增学习.pptx

PCR技术简史 DNA的复制 核酸体外扩增的设想 聚合酶链反应的发明 第1页/共24页 PCR技术简史 DNA的复制 核酸体外扩增的设想 聚合酶链反应的发明 引物酶 引物酶 第2页/共24页 PCR技术简史 DNA的复制 核酸体外扩增的设想 聚合酶链反应的发明 DNA 聚合酶 DNA 聚合酶 第3页/共24页 PCR技术简史 DNA的复制 核酸体外扩增的设想 聚合酶链反应的发明 第4页/共24页 PCR技术简史 DNA的复制 核酸体外扩增的设想 聚合酶链反应的发明 第5页/共24页 Kary B. Mullis The Unusual Origin of the Polymerase Chain Reaction 1989年美国《Science》杂志列PCR 为十余项重大科学发明之首,比喻1989年为PCR爆炸年,Mullis荣获1993年度诺贝尔化学奖。 第6页/共24页 生物样品 DNA片段 基因诊断 基因治疗 基因工程产品 法医学检测 人类学研究 …… 第7页/共24页 基因组DNA 获取特定DNA片段 扩增特定DNA片段 第8页/共24页 94℃变性 50-65℃退火 XX℃延伸 第9页/共24页 94℃ 55℃ 37℃ 第10页/共24页 Taq DNA聚合酶（thermus aquaticus) 酶活性(%) 温度(℃) 40 50 60 70 80 90 100 100 80 60 40 20 第11页/共24页 72℃ 94℃ 55℃ PCR循环 第12页/共24页 PCR的基本原理 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 第13页/共24页 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 重复1~3步 25~30轮 目的DNA片段 扩增100万倍以上 DNA双螺旋 DNA单链 与引物复性 DNA变性 形成2条单链 子链延伸 DNA加倍 第14页/共24页 PCR的基本原理 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 模板DNA 第15页/共24页 PCR的基本原理 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 引物1 引物2 第16页/共24页 PCR的基本原理 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 引物1 引物2 Taq酶 Taq酶 第17页/共24页 PCR的基本原理 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 第1轮结束 第2轮开始 第18页/共24页 PCR的基本原理 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 Taq Taq Taq Taq 第19页/共24页 PCR的基本原理 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 第2轮结束 第20页/共24页 PCR的基本原理 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 模板DNA 第1轮扩增 第2轮扩增 第3轮扩增 第4轮扩增 第5轮扩增 第6轮扩增 第21页/共24页 我们实验的反应体系 10×Taq聚合酶反应缓冲液 dNTP(20mmol/L)2μL 5’端引物（25pmol/μL）1μL 3’端引物（25pmol/μL）1μL 菌体DNA（约50ng/μL）1μL Taq DNA聚合酶（5U/μL） H2O 补足总体积25μL 第22页/共24页 反应条件为：首轮循环94℃变性2min；再接94℃30s，50℃30s，72℃1min，30个循环；最后72℃延伸20min。 取5ul反应液,1%的琼脂糖凝胶电泳检测扩增结果 第23页/共24页 感谢您的观看！ 第24页/共24页