鸡新城疫病毒及鸡传染性支气管炎病毒的检测二重荧光定量反转录聚合酶链反应法地方标准编制说明.docx

鸡新城疫病毒及鸡传染性支气管炎病毒的检测二重荧光定量反转录聚合酶链反应法地方标准编制说明 一、项目背景、来源及目的 1、项目背景 鸡新城疫(Newcastle disease，ND)是由新城疫病毒(Newcastle disease virus，NDV)引起禽的一种急性、热性、败血性和高度接触性传染病。以高热、呼吸困难、下痢、神经紊乱、黏膜和浆膜出血为特征。具有很高的发病率和病死率，是危害世界养禽业的重要传染病之一，该病被世界动物卫生组织(OIE)列为必须上报疫病，我国将其定为一类动物传染病。NDV是副黏病毒科、副黏病毒属的成员，为有囊膜的单股、负链RNA病毒。虽然只有1个血清型，但是不同毒株的毒力表现出很大的差异。 鸡传染性支气管炎（Infectious bronchitis，IB），是由鸡传染性支气管炎病毒（Infectious bronchitis virus，IBV）引起鸡的一种急性、高度接触性传染病，可引起鸡呼吸道、输卵管、肾脏、肠道及腺胃等多部位病变。病鸡表现为咳嗽、喷嚏、发出气管罗音。幼鸡流鼻液，蛋鸡产蛋数量和质量下降，肉鸡食欲不振，肾型病鸡肾肿大、苍白，有大量尿酸盐沉积。并可继发细菌性疾病如大肠杆菌病、沙门氏菌病等, 从而加重了对鸡群的危害, 给养禽业造成很大的经济损失。IBV 是冠状病毒科(Coronaviridae), 冠状病毒属(Coronavirus) 的代表种, 为外被囊膜的单股正链RNA 病毒。鸡传染性支气管炎病毒血清型众多, 且不同血清型毒株之间抗原性差异较大。 新城疫和传染性支气管炎常以单独或混合感染的方式感染家禽，发病率和死亡率都较高，对禽类造成巨大的危害。这两种疾病在流行病学、临床症状、病理变化等方面存在着许多相似的地方,因此临床上进行鉴别诊断存在很大的困难。目前常规检测NDV、IBV的技术主要有病毒分离、血清学试验和分子生物学试验等, 这些方法在敏感性、特异性、时效性等方面都存在各自的不足。因此，建立和制定NDV及IBV快速、敏感、准确的鉴别诊断方法，对确保我区畜牧业持续、稳定、健康发展具有重要意义。 目前，国内检测鸡新城疫病毒及鸡传染性支气管炎病毒二重荧光定量反转录聚合酶链反应法尚无地方标准、行业标准或国家标准。2012年以来，我单位承担的广西壮族自治区水产畜牧兽医局科技计划项目合同《林下饲养鸡主要疫病监测技术平台建立及流行病学研究》（编号：桂渔牧科1204935，主持人：屈素洁）在建立检测鸡NDV及IBV的快速鉴别诊断方法上开展了大量工作，取得较好科技成果。这些方法已经实验室及临床反复应用，证明具有快速、准确、特异、敏感、高通量、无污染等优点，可以用于临床样品的检测。 2、项目来源 本标准为省质量技术监督局下达给省动物疫病预防控制中心承担的20XX年第十一批省地方标准制定（修订）计划任务项目（X质监函[201XX836号），编号为20XX-1103。 3、项目目的 目前，国内检测和诊断鸡新城疫病毒及鸡传染性支气管炎病毒的方法，主要包括病原分离鉴定、病毒中和试验、ELISA和RT-PCR方法等，但检测鸡新城疫病毒及鸡传染性支气管炎病毒的二重荧光定量反转录聚合酶链反应法尚无国家标准和行业标准。由于荧光定量PCR检测方法快速、准确、敏感、操作较简便，易标准化，因此本项目尝试编写检测NDV及IBV的推荐性地方标准，内容涵盖应用二重荧光定量反转录聚合酶链反应法检测NDV及IBV的材料准备、操作方法及结果判定等。 二、工作概况 从20XX年4月开始，我单位承担了省水产畜牧兽医局科技计划项目合同《林下饲养鸡主要疫病监测技术平台建立及流行病学研究》。课题组在NDV及IBV二重荧光定量RT-PCR检测方法上开展了大量研究工作，取得较好成果。鉴于国内NDV及IBV二重荧光定量RT-PCR检测方法尚无地方标准、行业标准或国家标准的实际，课题组开展了相关资料的收集整理工作，确定标准编写目标和依据，同时起草制（修）订省地方标准项目建议书，积极开展标准的申报。20XX年10月接到省质量技术监督局下达的地方标准制定（修订）项目计划的通知后，迅速成立标准编制课题组，确定标准起草编写方案及时间进度表，并积极组织实施。至11月30日已完成标准初稿的编写。至12月15日完成测试和验证工作。12月31日已按GB/T 1.1《标准化工作导则第一部分：标准的结构和编写规则》要求完成标准征求意见稿的编写工作。经过课题组全体成员反复研讨、修改和校对，形成本标准征求意见稿。 本标准编制课题组人员包括：XXX等。具体分工如下： XXX：组长、主持人。负责标准的提出、起草、验证、审定、申报。 XXX：副组长。负责组织标准的起草、修改、实验室及临床验证。 XXX：负责标准的起草、校正、外联。 XXX：负责标准的实验室及临床验证。 XXX