猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪瘟病毒的检测多重反转录聚合酶链反应地方标准编制说明.docx

猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪瘟病毒的检测多重反转录聚合酶链反应地方标准编制说明 一、项目背景、来源及目的 1、项目背景 猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）可以引起以母猪的繁殖障碍及各种年龄猪特别是仔猪的呼吸道症状为特征的猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）。该病最早于19XX年在美国首次发生，现已呈世界性分布。我国最早于1996年分离到美洲型PRRSV，20XX年分离到美洲型PRRSV高致病性变异株，20XX年分离到病性欧洲型PRRSV。多年来，PRRSV是我国猪群中最重要病原之一，给我国养猪业造成了巨大的经济损失。 PRRSV分为两个基因型，即以VR-2332株为代表的美洲型和Lelystad virus（LV）为代表的欧洲型，其基因组核苷酸序列的同源性仅为60 %左右。PRRSV属于套式病毒目动脉炎病毒科动脉炎病毒属的成员，为有囊膜的单股正链RNA病毒，其基因组大小为15?kb左右，包含9个开放阅读框。目前，在中国流行的PRRSV以美洲型毒株为主，但也有欧洲型PRRSV致病的报道。PRRSV流行毒株的多样性，是PRRS的监测、诊断和防控面临新的严峻挑战。 猪瘟（Classical swine fever, CSF）是由猪瘟病毒（Classical swine fever virus，CSFV）引起猪的一种高度接触性急性传染病，以高稽留热、出血、梗死、坏死和高死亡率为主要特征。CSFV属于黄病毒科瘟病毒属的成员，为有囊膜的单股正链RNA病毒，其基因组大小为12?kb左右，包含1个开放阅读框。长期以来，我国实行猪瘟疫苗强制免疫政策，使猪瘟得到了有效控制，但由于疫苗质量不稳定、免疫程序不合理、防疫措施不当等原因，猪瘟仍时有发生，每年因猪瘟死亡的猪只约占病死猪只的1/3，猪瘟仍是危害我国养猪业发展的头等疫病。对CSFV的及时监测及准确诊断对有效防控CSF显得格外重要。 PRRS 和CSF均为我国一类传染病，两者在临床症状和病理变化上不易区分。同时，两者在临床上的混合感染、继发感染也比较常见。而且，两者与伪狂犬病病毒（PRV）、猪细小病毒（PPV）等重要病原所致的某些症状也难以区分。因此，建立和制定PRRSV和CSFV的快速鉴别诊断技术规程，快速、准确地进行诊断，为正确处置和防控这两种疫病，将损失减少到最低限度，对确保我区畜牧业持续、稳定和健康发展具有重要意义。 当前，单重RT-PCR检测方法已作为CSFV和PRRSV检测的国家标准。应用多重RT-PCR方法同时检测PRRSV和CSFV的文献国内外均有报道，但没有归纳总结形成地方标准、行业标准或国家标准。20XX年以来，我单位在完成省青年科学基金项目《高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒分子流行病学及快速诊断方法研究》（编号：桂科青0832057，主持人：施开创）的过程中，根据我区重大动物疫病监测、检测的需要，研制、开发了PRRSV和CSFV多重RT-PCR检测方法，并用于临床检测，效果显著。该方法经实验室验证及临床反复应用，证明具有快速、准确、特异、敏感、高通量、无污染等优点，有关论文已被国家级核心期刊《中国预防兽医学报》、《动物医学进展》录用、发表，获得国内同行的认可。 2、项目来源 本地方标准为省质量技术监督局下达给省动物疫病预防控制中心承担的20XX年第十二批省地方标准制定（修订）计划项目（X质监函[?20XX?]?884号），编号为20XX-12005。 3、项目目的 目前用于检测CSFV 和PRRSV 的方法主要有病毒分离、免疫过氧化物酶单层细胞试验( IPMA) 、免疫荧光试验( IFA) 和RT-PCR。由于RT-PCR检测方法快速、准确、敏感、操作较简便，易标准化，多数基层单位均具备开展条件，易于推广应用。但能够同时检测和区分美洲型PRRSV、欧洲型PRRSV和CSFV的多重RT-PCR方法迄今尚无国家标准、行业标准或地方标准，所以，建立一种同时检测和区分这3种病毒的方法十分必要。因此，本项目制定了检测美洲型?PRRSV、欧洲型PRRSV和CSFV的推荐性地方标准，内容涵盖应用多重RT-PCR方法检测美洲型PRRSV、欧洲型PRRSV和CSFV的材料准备、操作方法及结果判定等。 二、工作概况 从20XX年5月开始，我单位承担了省青年科学基金项目《高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒分子流行病学及快速诊断方法研究》。课题组在PRRSV和CSFV的快速鉴别诊断方法上开展了大量研究工作，取得较好成果。根据国内检测和诊断PRRSV和CSFV多重RT-PCR检测方法尚无国家标准、行业标准及地方标准的实际，课题组开展了相关资料的收集整理工作，确定标准编写目标和依据，同时起草制订省地方标准项目建