基因工程的基本操作步骤.ppt

1、将目的基因导入植物细胞的方法： 易感染双子叶植物和裸子植物，对大多数单子叶植物没有感染能力 ②原理： ①农杆菌特点： （1）农杆菌转化法 Ti质粒上的T-DNA可以转移到受体细胞，并整合到受体细胞染色体的DNA上。 第二十五页，共五十页。 ③过程： 1、将目的基因插入到Ti质粒的T-DNA上 2、将重组Ti质粒导入农杆菌 3、用农杆菌感染植物体细胞 第二十六页，共五十页。 （2）基因枪法 适用于 单子叶植物 第二十七页，共五十页。 （3）花粉管通道法 第二十八页，共五十页。 2、将目的基因导入动物细胞 ①方法：显微注射法 ②程序： 取卵 显微注射 受精卵 早期胚胎培养 胚胎移植 第二十九页，共五十页。 3、将目的基因导入微生物细胞 用Ca2+处理细胞 ①原核生物特点： 繁殖快、单细胞、遗传物质少 ②方法： 表达载体与感受态细胞混合 感受态细胞吸收DNA分子 感受态细胞 第三十页，共五十页。 四环素 抗性基因 氨苄青霉 素抗性基因 四、目的基因的检测与鉴定 大肠杆菌 第三十一页，共五十页。 四、目的基因的检测与鉴定 抗原－抗体杂交法 分子杂交法 DNA分子杂交法 目的基因是否翻译 目的基因是否转录 目的基因是否导入 方法 检测对象 结果 个体水平的鉴定 是否显示出杂交带 第三十二页，共五十页。 基因探针：（制作探针的要求） ① 含有目的基因 ② 单链 ③ 标记——放射性同位素或荧光 第三十三页，共五十页。 四、目的基因的检测与鉴定 个体水平的鉴定（受体是否表现出相应性状） 1、鉴定转基因抗虫棉是否具有抗虫性可采用 ___________ 实验 2、如何鉴定转基因抗盐烟草是否成功？ 接虫 在转基因抗盐烟草田中浇灌盐水，观察其 是否有抗盐特性 3、用乳腺生物反应器生产人血清白蛋白，如何 确定转基因羊培养成功？ 检测羊乳中是否含有人的血清白蛋白 第三十四页，共五十页。 归纳: 基因工程的基本操作程序 获取目的基因 从基因文库 利用PCR技术 人工合成 构建基因表达载体 目的基因、启动子、终止子、标记基因 将目的基因导入受体细胞 农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法、显微注射法 目的基因的检测与鉴定 检测：是否插入、转录、翻译 鉴定：是否有转基因特性 第三十五页，共五十页。 * * * * * * 1.2 基因工程的基本操作程序 第一页，共五十页。 基因工程基本操作的四个步骤 1、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建 3、将目的基因导入受体细胞 4、目的基因的检测与鉴定 第二页，共五十页。 一、目的基因的获取 1、目的基因主要是指______________________ 编码蛋白质的结构基因 也有一些具有调控作用的因子 2、获取目的基因的方法 （1）从基因文库中获取 （2）利用PCR技术扩增 （3）人工合成 ________________________________________ 第三页，共五十页。 (一)从基因文库中获取目的基因 1.基因文库 将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。 2.基因文库的分类: 种类 基因组文库：含有一种生物的全部基因 部分基因文库：只包含了一种生物的部分基因，如：cDNA文库 第四页，共五十页。 基因文库的构建过程 限制酶 拼接到载体上 导入受体细胞扩增 通过对受体菌群体的培养而储存一种生物的全部基因。 基因组文库 3.基因文库的构建方法 第五页，共五十页。 提取生物某发育时期的mRNA 单 链DNA 逆转录酶 DNA聚合酶 双链CDNA (只含该生物部分基因) 与载体连接导入到受体菌群储存 cDNA文库 第六页，共五十页。 基因组文库和cDNA文库比较 第七页，共五十页。 原核细胞的基因结构(补充内容） 非编码区 非编码区 编码区 编码区上游 编码区下游 与RNA聚合酶结合位点 启动子 终止子 ①不编码蛋白质。 ：编码蛋白质 ,连续不间断 编码区 非编码区 原核细胞的 基因结构 ②调控遗传信息表达,上 游有启动子，下游有终止子 启动子 第八页，共五十页。 真核细胞的基因结构（补充内容） 编码区 非编码区 非编码区 与RNA聚合酶 结合位点 内含子 外显子 启动子 终止子 编码区上游 编码区下游 真核细胞的 基因结构 编码区 非编码区 外显子：能编码蛋白质的序列 内含子：不能编码蛋白质的序列 ：有调控作用,上游有启动子，下游有终止子 非编码序列： 包括非编码区和内含子 第九页，共五十页。 原核细胞与真核细胞的基因结构比较 思考 编码相同数目氨基酸的蛋白质