SOP-WSW-411《药物敏感性试验标准操作规程》.pdf

1. 目的 规范药物敏感性试验标准操作程序，确保药敏结果准确。 2. 原理 将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种待检菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸取 琼脂中的水分溶解后会不断地向纸片周围区域扩散，形成递减的梯度浓度，在纸片周围抑 菌浓度范围内待检菌的生长被抑制，从而产生透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映检测菌对 测定药物的敏感程度，并与该药对待检菌的最低抑菌浓度（MIC）呈负相关，即抑菌圈愈 大，MIC愈小。 3. 试剂 MH培养基、无菌生理盐水、药敏纸片、无菌棉签、35℃孵育箱、标准比浊管或比浊仪。 4. 质控 4.1常用细菌药敏质控标准菌株参见CLSI规定。 4.2质控菌株每日随临床标本一起进行药敏试验，测定质控菌株的抑菌环。质控菌株的抑菌 环在允许范围之内，说明结果可信。 4.3质控的频率 由于纸片法药敏试验是很稳定的，在不失控的时候，可以每周作一次到两 次质控菌株的测定。如果发现有失控的情况，就必须每日作一次，寻找失控的原因并予 以纠正。如果连续30日失控3次的，可以恢复每周一次。 5. 操作步骤 5.1挑取4～5个纯培养菌落 5.2用无菌生理盐水或MH 肉汤校正菌液浊度，使其与标准比浊管的浓度相同。 5.3用无菌棉拭蘸取校正过的菌液，在试管壁上挤压几次，压去多余的菌液，涂布整个MH 平板表面，再重复两次，每次旋转平板60º，使整个平板涂布均匀，最后用棉拭涂布平板 四周边 5.4涂布菌液的平板于室温中干燥3～5min后，无菌镊子取药敏纸片，贴于平板表面，并用 镊尖轻压一下纸片，使其贴平。每张纸片的间距不小于24mm，纸片的中心距平板的边 缘不小于15mm，90mm直径的平板宜贴6张药敏纸片。 5.5将贴好纸片的平板置35℃ 孵育18～24h后，用卡尺量取抑菌圈直径。个别菌孵育温度， 时间及条件应按照CLSI规定 6. 结果判断 根据CLSIM100必威体育精装版标准将所测抑菌圈的大小，报告为敏感（S）、中介/中敏（I）或耐 药（R）。 7. 注意事项 7.1测试链球菌时应测量生长受抑制区域而不是溶血受抑制区域。 7.2如抑菌圈内有独立生长的菌落，则提示可能有杂菌，需要重新分离鉴定和药敏试验。此 菌落也可能为高频突变耐药株。 7.3某些细菌的磺胺类药抑菌圈内可能有微量的细菌生长，可忽略不计，应以外圈为准。 8. 临床意义 测定细菌对药物的敏感程度，指导临床合理选用抗菌药物。