水质肠球菌的测定酶底物法.pdfVIP

水质 肠球菌的测定 酶底物法 警告：肠球菌为致病微生物，应该在相应级别的生物安全实验室中检测，操作时应按要求佩戴生物 防护用品，注意废弃物的生物消毒。 1 范围 本标准规定了测定生活饮用水及其水源水中肠球菌的酶底物法。 本标准适用于生活饮用水及其水源水中肠球菌的测定。 当水样体积为100mL时，本方法的检测限为1 MPN/100 mL。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 5750.2—2006 生活饮用水标准检验方法 水样的采集与保存 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 方法原理 肠球菌在41 ℃温度条件下培养24 h，能够产生β-D-葡糖苷酶，将选择性培养基中荧光底物4-甲基 伞形酮β-D-葡糖苷（4-MUG）分解，分解后的荧光底物在366 nm紫外光下产生荧光，统计阳性反应数量， 通过查询MPN表，计算样品中的肠球菌浓度。 4 试剂和材料 4.1 市售 Enterolert 培养基，也可以使用其他等效产品。 4.2 生理盐水：氯化钠浓度为 0.85 %。 4.3 标准菌株：粪肠球菌有证标准菌株，大肠埃希氏菌有证标准菌株。 4.4 无菌水：实验用水满足GB/T 6682二级及以上分析实验室用水要求，经121 ℃高压蒸汽灭菌20min， 备用。 4.5 硫代硫酸钠：纯度≥98 %。 4.6 硫代硫酸钠溶液（5.0 g/L）：称取 0.5 g 硫代硫酸钠（4.5），精确至 0.1 g，溶于适量水中，定 容至 100 mL，121 ℃高压灭菌 20min，备用。 4.7 磷酸盐缓冲液（PBS）： 氯化钠 8.01 g 氯化钾 0.2 g 磷酸氢二钠 1.44 g 磷酸二氢钾 0.24 g 1 上述成分溶解于950 mL无菌水（4.4）中，用盐酸调节溶液pH值到7.4后加无菌水（4.4）定容至1 000 mL，121 ℃高压灭菌20min，备用。 5 仪器和设备 5.1 采样瓶：具螺旋盖或磨口塞的 100 mL、500 mL 玻璃瓶。 5.2 恒温培养箱：允许温度偏差 41 ℃±1 ℃。 5.3 高压蒸汽灭菌器：121 ℃可调。 5.4 程控定量封口机：用于定量盘的封口。 5.5 紫外灯及配套灯箱：366 nm。 5.6 定量盘：51孔或 97 孔。 5.7 天平：精确至 0.001 g。 5.8 容量瓶：10 mL 和100 mL。 6 样品 使用灭菌处理的玻璃瓶 （也可选用有效期内市售无菌采样瓶和采样袋）采集水样，采样量不少于200 mL。加入硫代硫酸钠溶液（4.6）去除残留余氯（每125 mL容积加入20 μL的硫代硫酸钠溶液，水源水肠 球菌测定忽略此步），样品采集与保存按照GB/T 5750.2—2006中微生物指标要求执行。 7 分析步骤 7.1 定性分析 用灭菌处理过的100 mL采样瓶（5.1）量取100 mL水样，加入一包培养基（4.1），混摇均匀使之完 全溶解，放入恒温培养箱（5.2）中41 ℃±1 ℃培养24h。