炭疽检验技术课件.ppt

三、致病性与免疫性 四、抵抗力 炭疽病原学检查 炭疽血清学检查 五、炭疽实验室检查 炭疽病原学检查 标本采集和样品处理 细菌培养 涂片、革兰染色、荚膜染色、光镜检查 Ascoli试验 动力检查 噬菌体裂解和青霉素敏感性试验 串珠试验 生化试验 炭疽PCR基因检测 五、炭疽实验室检查 炭疽血清学检查 标本采集和样品处理 血清中抗炭疽芽胞和毒素IgG水平检测 （酶联免疫吸附实验ELISA） 血清中抗炭疽荚膜抗体胶体金检测 五、炭疽实验室检查 《人间传染的病原微生物名录》 序号 病原菌名称 危害程度分类 实验活动所需生物安全实验室级别 学名 中文名 大量活菌操作 动物感染实验 样本检测 非感染性材料的实验 1 Bacillus anthracis 炭疽芽孢杆菌 第二类 BSL-3 ABSL-3 BSL-2 BSL-1 2 Brucella spp 布鲁氏菌属 第二类 BSL-3 ABSL-3 BSL-2 BSL-1 3 Burkholderia mallei 鼻疽伯克菌 第二类 BSL-3 ABSL-3 BSL-2 BSL-1 4 Coxiella burnetii 伯氏考克斯体 第二类 BSL-3 ABSL-3 BSL-2 BSL-1 大量活菌操作：实验操作涉及“大量”病原菌的制备，或易产生气溶胶的实验操作（如病原菌离心、冻干等）。 动物感染实验：特指以活菌感染的动物实验。 样本检测：包括样本的病原菌分离纯化、药物敏感性实验、生化鉴定、免疫学实验、PCR核酸提取、涂片、显微观察等初步检测活动。 非感染性材料的实验：如不含致病性活菌材料的分子生物学、免疫学等实验。 炭疽病原检验程序 标本 处理（方法根据标本情况选择） 直接涂片、 革兰染色、 荚膜染色、 光镜检查 接种培养 （可用选择性培养基、血培养基） 37℃，16~48 h Ascoli试验 基因检测 可疑菌落（形态） 初检 培养性鉴定试验 深入鉴定 涂片、革兰染色、荚膜染色、 光镜检查 动力检查 液体培养 噬菌体裂解和青霉素敏感性试验 产荚膜培养及光镜检查 串珠试验 生化试验 基因检测 酶免疫法测外毒素 动物毒性测定 采取标本时必须遵循的两条原则 1、尽可能的在抗生素治疗前采取标本； 2、除必要时并在具备条件的实验室内，不得用解剖的方式获取标本，所需的血液与组织标本，均应以穿刺方式取得。 （一）炭疽病原学检查—— 标本采集和样品处理 1、血液标本 所有的疑似病例和病畜，都应采取血液标本5-10ml，标本量至少应满足下列检查的需要： 涂片进行显微镜检查； 接种培养基进行细菌分离培养； 分离血清检查抗体； 常规血液检查。 荧光定量PCR检测 2、皮肤溃疡标本 在皮肤炭疽病人溃疡边缘用棉拭子擦拭，沾取分泌物。 （一）炭疽病原学检查—— 标本采集和样品处理 3、粪便与呕吐物标本 表现消化道症状的可疑病人收集粪便或呕吐物标本，特别注意选取其中混有血液的部分，置无菌的容器中。 4、痰与咳碟标本 表现为呼吸道症状的可疑病人应收集其痰液标本，无痰液者，应取供细菌分离培养用的培养基，打开平皿盖置病人口鼻10cm处；令病人对平皿咳嗽，然后迅速盖上平皿。 （一）炭疽病原学检查—— 标本采集和样品处理 5、脑脊液标本 表现为脑膜刺激症状的病人，腰椎穿刺获取脑脊液。 6、尸体标本 食草动物死于炭疽时，通常会从口、鼻、肛门等腔道开口流出血液，这种血液应是首先采取的标本。如果血液已渗入土壤，则应收集混有血液的土壤作为标本。没有血液流出，或已不可能获取血液标本时，可通过穿刺心脏获得血液或穿刺肝脏等实质性脏器获得组织标本。 （一）炭疽病原学检查—— 标本采集和样品处理 7、肉类标本 如果怀疑罹患炭疽的牲畜已被宰杀，或对商品肉类进行常规检查时，可剪取小块肉类标本。如有可能，特别应剪取肝脏、脾脏等富含血以及含有淋巴组织的标本。 8、毛皮或其他可疑污染物品标本 剪取小块毛皮或其他可疑物品，剪碎置无菌试管内，加适量的无菌生理盐水浸泡。 （一）炭疽病原学检查——