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中国解剖学学会数码显微摄影培训班(第一届)
研究生科研技能训练Ⅴ(大型仪器原理与操作)
光学显微镜技术原理及应用
Wei Yin （尹伟）
Core Facilities,
Zhejiang University School of Medicine
Tel
yinwei5651@
2021-3-12
主要内容
• 显微镜光学基础
• 现代光学显微镜
• 荧光显微镜技术
• 显微镜使用技巧
显微镜光学基础-纲要
显微镜历史
光的物理学解释
光波的特性
显微镜放大原理
显微镜成像原理
何谓显微镜
A. 1665 英国人Robert Hook 用自己设计与制造的显微镜
（放大倍数为40-140 倍 观察了软木（栎树皮)的薄片
B. 1680荷兰人列文虎克第一个用显微镜观察活细胞 (精子/红细胞原生生物等)
C. 19 世纪30 年代 德国人施莱登 Schleiden 、施旺Schwann 提出：
一切植物、动物都是由细胞组成的，细胞是一切动植物的基本单位。
这一学说即 “细胞学说（Cell Theory)”
虎克的显微镜
Imaging system
Magnification system
Light source
Object
现代显微镜
Imaging system
Magnification system
Light source
Object
光的物理学解释
光是电磁波
光是在空间传播的电场和磁场的
振动，即电磁波。光的传播方向
和电场或磁场的振动方向垂直
2
功率∝ E ，速度 =C，波长=λ,
频率ν =c / λ
光在空间传播的速度是恒定的
30 万公里／秒
可见光
光波根据波型分类
单色光和多色光、偏振光和非偏振光、相干光和非相干光、准直光和发散光。
光波的特性
反射、折射、衍射
光具有波的特性，也具有粒子的特性，因此也被称为光子。
显微镜放大原理-凸透镜成像特点
物镜
目镜
显微镜放大原理
（物镜+目镜成像）
物体 物镜成像
F F’
目镜成像
倒立放大
虚像
显微镜成像原理-点光源成像
FWHMlater FWHMaxi
显微镜成像原理-以光栅作为样本成像
非偏离光
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