医学院大学化学实验.docxVIP

医学院大学化学实验 实验一、用紫外分光光度法同时测定维生素B2和维生素C 实验二、BSA蛋白等电点的测定 实验三、纳米金的制备与表征实验四、纳米金对BSA蛋白等电点的影响 实验一、用紫外分光光度法同时测定维生素B2和维生素C 1．实验目的 掌握在紫外区中同时测定—个双组分体系维生素B2和维生索C的实验方法。 2．仪器和试剂 916型紫外-可见分光光度计； 石英比色皿2只， 容量瓶、50ml离心管、称量纸若干。 维生素B2 （AR）：VC： 冰醋酸，氢氧化钠（1M），未知溶液。 3．实验原理 维生素B2在224、267、375、444nm处具有吸收峰，一般取444nm的波峰为定量吸收峰。维生素B2又叫核黄素，化学名：7,8-二甲基－10［(2S,3S,4R) - 2,3,4,5-四羟基戊基］苯并蝶啶-2,4（3H，10H）-二酮， 分子式：C17H20N4O6 ， 分子量：376.36 。分子结构如下图 VB2的分子结构 VC的分子结构 维生素C在220nm-320nm范围内有吸收峰，一般取243nm的波峰为定量吸收峰。维生素C又称抗坏血酸，分子量为176.1，其分子结构中具有二烯醇结构，其结构如图所示。抗坏血酸参与体内一系列代谢和反应,能促进胶原蛋白和粘多糖的合成,增加微血管的致密性,降低其通透性及脆性,增加机体抵抗力.缺乏时,引起造血机能障碍、贫血、微血管壁通透性增加,脆性增强和血管容易破裂出血,严重时肌肉、内脏出血死亡。人体不能自身制造VC，必须不断地从食物中摄入Vc，通常还需储藏能维持一个月左右的Vc。 在同一溶液中同时测定双组分的具体方法：在a和b的最大吸收波长λ1及λ2处，分别测定混合物的吸光度Aλ1、Aλ2，如下图： 两组分吸收光谱图 （I：吸收光谱不重叠；II：二组分吸收光谱重叠） 然后解联立方程组，求得出各组分的含量。 在λ1处： 在λ2处： 式中：Aλ1、Aλ2分别为混合液a+b在λ1、λ2处吸光度； Aλ1a、Aλ2a分别是 Aλ1b、Aλ2b分别是混合溶液中组分b在λ1、λ2处吸光度。 首先要从已知浓度的各单独组分吸收光谱中获得： 联立求解式（1）和（2）组成的方程组可求得Ca、Cb。采用此法可求得两种以上组分的含量。 4．操作步骤 1. VB2标准溶液的配置：准确称取75mg核黄素（维生素B2），置于1000 mL容量瓶中，加少量水使维生素B2溶解，最后加水定容至刻度得到维生素B2标准试剂（0.075 mg/mL）。 2. VB2系列标准溶液的配制：用移液管分别吸取0ml、2mL、4mL、5mL、6mL、8mL维生素B2标准试剂于6个50 mL离心管中，加水定容至25ml，摇匀。 3、确定VB2最大吸收波长，从上述4ml试管中取2ml加入到比色皿中，用紫外分光光度计进行220-500nm的光谱扫描，找出其吸光度最大时的吸收波长（?max=444nm）。 3、绘制VB2标准曲线：用移液枪分别吸取0ml、2mL、4mL、5mL、6mL、8mL离心管中的溶液2ml加入到比色皿中，在?max444nm 和?max243nm处分别测6支试管的吸光度，以VB2溶液浓度为横坐标，以蒸馏水为参比，A444nm和A243nm吸光度数值为纵坐标，建立VB2浓度与吸光度的标准曲线 4、VC标准溶液的配置：称取0.0132gVc标准品于100ml的烧杯中，用超声波助溶器帮助溶解并定容于500ml容量瓶中，摇匀，配成贮备液。 5、配制VC系列标准溶液：从上述贮备液中分别吸取0ml、0.5ml、1ml、2ml、4ml、8mlVc加入50ml离心管中，用蒸馏水定容至25ml。 6、确定VC最大吸收波长 从上述4ml试管中取2ml加入到比色皿中，用紫外分光光度计进行220-500nm的光谱扫描，找出其吸光度最大时的吸收波长（?max=243nm）。 7.绘制VC标准曲线: 用移液枪分别吸取分别吸取0ml、0.5ml、1ml、2ml、4ml、8mlVC 6支离心管中的溶液2ml加入到比色皿中，在?max444nm 和?max243nm处分别测6支试管的吸光度，以VC溶液浓度为横坐标，以蒸馏水为参比，A444nm和A243nm吸光度数值为纵坐标，建立VC浓度与吸光度的标准曲线。 8.待测样品溶液制备 （1）VB2待测液的配置：取待测VB2片剂1片研细，称重后取5mg置于100mL烧杯中，加冰醋酸3mL与水10mL，置水浴（100 ℃）加热1小时，使维生素B2溶解，冷却后转移至50ml离心管中，加氢氧化钠液（1 mol/L）3 mL，用水稀释至刻度25ml作为待测液。 (2)Vc待测液的配置：取待测Vc片剂1