荧光定量分析方法.pptx

会计学;第1页/共19页;为常数，其值取决于荧光效率; 根据 ，在低浓度时，溶液的荧光强度与溶液中荧光物质的浓度呈线性关系；但当ECl0.05时，(3)式括号中第二项以后的数值就不能忽略，此时荧光强度与溶液浓度之间不呈线性关系。;荧光分析法的灵敏度比紫外分光光度法高，是因为：;二、定量分析方法 1 依据：荧光强度与荧光物质浓度的关系，在低浓度时二者成线性关系：F=KC 2 荧光定量分析方法： 校正曲线法：配制空白溶液以及一系列浓度梯度的待测物的标准溶液，试样经过相同的处理之后分别测定荧光强度：F0、Fs、Fx，然后作（ Fs - F0）— C 曲线，根据（Fx–F0)，从工作曲线上求得待测物的浓度（或含量）。 ;例题：1g谷物的制品试样，用酸处理，分离出核黄素(VB2)及少量无关杂质，加入少量KMnO4，将核黄素氧化，过量的KMnO4用H2O2除去。将此溶液移入50ml容量瓶中，稀释至刻度。吸取25ml放入样品池中以测量荧光强度（核黄素中常含有荧光的杂质叫光化黄）。事先将荧光计用硫酸奎宁调整至刻度100处。测定得到氧化液的读数为6.0格。加入少量的连二亚硫酸钠(Na2S2O4)，使氧化态核黄素（无荧光）重新转化为核黄素，这时荧光计读数为55格。在另一样品池中重新加入24ml被氧化的核黄素溶液，以及1ml核黄素标准溶液0.5μg/ml，这一溶液的读数为92格，计算每克样品中含核黄素的μg数？(课本P2307题) ;解：25ml氧化液：荧光读数6.0格，相当于空白背景； 25ml测定液：荧光读数55格，实际核黄素的荧光读数为55-6.0=49格； 24ml氧化液+1ml标准核黄素：荧光读数92格； 标准核黄素0.5μg/ml：荧光读数92-6=86格；;第三节 荧光分光光度计和荧光分析新技术;二 荧光分析新技术简介 1 激光荧光分析法 2 时间分辨荧光分析 3 同步荧光分析 4 胶束增敏荧光分析;小结;4.分子处于激发态后，去活化过程主要有以下六种方式：;;5.荧光的激发光谱和发射光谱：可用来鉴别荧光物质，并作为选择适当测定波长的依据。;6.溶液荧光光谱的特征： （1）斯托克斯位移：荧光波长总是大于激发光波长； （2）荧光光谱的形状与激发光波长无关； （3）荧光光谱与激发??谱的镜像关系。;9.分子结构与荧光的关系： （1）长共轭分子具有π→π*跃迁的具有较强的荧光强度； （2）刚性平面结构分子具有较强的荧光效率； （3）共轭体系上的取代基对荧光光谱和荧光强度有很大影响。;;注意： 1.荧光物质的最大激发波长和最大荧光波长是鉴定物质的依据，也是定量测定时最灵敏的条件； 2.当荧光物质的激发光谱有两个峰时，不管用哪一个峰的波长作为激发光，荧光光谱只出现一个峰。这是因为无论分子激发到 ，荧光的发生总是从 的最低振动能级开始的。;作业： 1.课本P2294、5、6； 2.学习指导相应习题。