药物分析13生化药物分析.pptx

会计学一、概述第1页/共21页生化药物生物药物（biopharmaceuticals）：利用生物体、生物组织和器官制得的天然活性物质及其类似物生物制品（生物技术药物）分类没有严格的界限 第2页/共21页生化药物biochemical drugs 动植物及微生物提取、分离的天然生物活性物质及半合成得到生命基本物质及其衍生物等人纤维蛋白原氨基酸、Pr类凝血酶、胰蛋白酶酶、辅酶类肝素、玻璃酸多糖类 脂类 核酸类第3页/共21页生物制品biological products 应用普通的或以基因工程、细胞工程、蛋白质工程、发酵工程等生物技术获得的微生物、细胞及各种动物和人源的组织和液体等生物材料制备的药品 菌苗、疫苗、类毒素免疫血清其他（血液制品、组织制品等） 自动免疫制品 诊断制品第4页/共21页基因工程药物 biotechnology drugs 利用重组DNA等生物技术生产的药物分离纯化受体细胞表达该Pr将该基因导入受体细胞分离或合成控制该Pr合成的基因发现并确定有治疗作用的Pr胰岛素原胰岛素原基因mRNA与质粒连接感染E.coli反转录酶(A)n胰岛素原mRNA胰脏重组质粒cDNA转化细菌第5页/共21页重组胰岛素原的合成第6页/共21页基因工程药物主要类别蛋白质多肽类： 激素类及神经递质类 细胞因子类 酶及凝血因子类核酸类： 反义寡核苷酸 等人生长激素释放抑制因子（Human Somatotin）干扰素（Human Interferons）链激酶（Streptokinase） 第7页/共21页5. 生化药物和基因工程药物特点1）共同特点：活性强，毒副作用小2）分子量大，结构确证难3）全过程的质量控制：从原料、菌种到生产设备、中间体、产品4）生物活性检查5）安全性检查：异常毒性检查、过敏物质检查、外源性DNA残留量、宿主菌蛋白残留量等 6）效价（含量）测定二、检验的程序和方法第8页/共21页收录于《中国药典》和《中国生物制品规程》杂质检查安全性检查含量（效价）测定鉴别标准品样品胰蛋白酶酶解 V8蛋白酶酶解第9页/共21页1.鉴别反应序列信息1）理化鉴别法：UV、肽图等RP-HPLC法分析重组人胰高血糖素类多肽－1（7－36）肽图谱《药物分析杂志》2005，25(1)24-26rhGLP-1(7-36)由30个氨基酸组成，结构中含2Lys、1Arg、1Asp、3GluMarker Sample116.0k66.2k45.0k35.0k25.0k18.4k14.4k免疫双扩散法SDS第10页/共21页专属性强，应用广泛2）生化鉴别法：免疫法、酶法、电泳法等3）生物鉴别法：动物试验等 萄聚糖凝胶立体网状结构图第11页/共21页2. 杂质检查1）一般杂质：氯化物、重金属、水分等2）特殊杂质：有关物质等 高效凝胶过滤色谱法(High Performance Gel Filter ，HPGFC）、RP-HPLC62145312048时间(min)第12页/共21页标准蛋白色谱图 1.右旋糖酐蓝2.醛缩酶3.血清白蛋白4.碳酸酐酶5.抑蛋白酶肽6.酪氨酸第13页/共21页 重组人肿瘤坏死因子相关调亡诱导配体（rhTRAIL）质控方法和质量标准的研究 《药物分析杂志》2005，25（3）253-257 Synmetry 300 C18柱（3.9×150mm）第14页/共21页3. 安全性检查1）热原检查 家兔法、鲎试剂法2）降压物质检查3）过敏试验4）异常毒性试验 豚鼠、大鼠存活试验5）无菌试验6）宿主细胞蛋白残留、DNA残留ELISA法第15页/共21页4. 含量（效价）测定1）理化分析法： 重量法、滴定法、 电化学法、光谱法 色谱法（HPLC法）例：蛋白质含量测定（ChP2005三部） 凯氏定氮法 Lowry法 双缩脲法第16页/共21页2）生化分析法 酶法： 免疫分析法酶活力测定法 以酶为分析对象进行分析酶分析法以酶为分析工具或分析试剂 的分析方法 第17页/共21页3）生物检定法 药物对生物体或离体器官所起的生物活性 测定效价时采用参考品，体内、体外方法测定活性，计算效价IU 同时测定蛋白含量，计算特异比（比活性，IU/mg）第18页/共21页例：冻干基因工程α1b干扰素制造及检定规程 本品系用从健康人白细胞中获得的α1b干扰素基因重组质粒，传染大肠杆菌，使之高效表达人α1b干扰素，经高度纯化后冻干制成。用于治疗慢性乙型肝炎、丙型肝炎和毛细胞白血病等疾病。　主要包括以下内容：1 菌种2 发酵3 收菌 4 菌体裂解与粗制干扰素制备5 浓缩与纯化6 稀释、除菌过滤7 半成品检定8 除菌半成品检定9 成品检定10规格 11保存与效期12 冻干基因工程α1b干扰素使用说明书第19页/共21页半成品和成品的检验项目包括：检查