药物分离纯化技术制备色谱分离技术.pptx

会计学1 2制备色谱技术制备薄层色谱法设备简单，操作方便、分离快速、灵敏度及分辨率高；切割谱带更加方便；自动化：自动点样仪、自动程序展开仪、薄层扫描仪、多种强制流动技术、多种联用技术如傅立叶变换红外、拉曼、质谱等。第1页/共53页 3制备色谱技术常规制备薄层色谱PTLC薄层板制备 为了增大上样量，增加了吸附剂用量。固定相：硅胶、氧化铝、纤维素、C2、C18等反相健合硅胶支撑：玻璃板或铝箔平均25?m, 5~40 ?m硅胶H、硅胶G、硅胶F254、硅胶F365、硅胶P第2页/共53页 4制备色谱技术硅胶粒径范围影响：越细越均匀，分离度越高，但？粒径范围宽，分离效率低，怎么办？------薄层厚度的渐变 薄层厚度从底部到前沿逐渐增加，这样展开剂的速度逐渐变慢，样品谱带在展开过程中逐步富集，可保持较窄的谱带。第3页/共53页 5制备色谱技术薄层板的制作方法： 常采用湿法：平铺法和涂铺法。混合平铺涂铺器自然干燥一夜105-120℃活化黏合剂硅胶煅石膏或羧甲基纤维素钠水溶液第4页/共53页 6制备色谱技术薄层色谱条件选择操作参数流速展开模式分离距离样品量流动相选择性溶剂强度黏度展开缸类型薄层板和展开缸空腔体积比值温度蒸气相固定相薄层厚度颗粒大小质量开放型操作不连续第5页/共53页 7常用溶剂(1)电子接受体溶剂：苯、甲苯、乙酸乙酯、丙酮等；(2)质子给体溶剂：异丙醇、正丁醇、甲醇、无水乙醇等；(3)强质子给体溶剂：氯仿、冰醋酸、甲酸、水等；(4)质子受体溶剂：三乙胺、乙醚等；(5)偶极作用溶剂：二氯甲烷(6)惰性溶剂：环己烷、正己烷等。制备色谱技术第6页/共53页 8制备色谱技术上样和展开先用甲醇展开一次，除去可能存在的杂质；低挥发性溶剂溶解样品会引起样品带变宽，因此选用挥发性溶剂（己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯等），且溶剂极性尽可能小。样品浓度以能均匀分布于吸附剂表面不析出为宜，5-10%；带状点样，尽可能窄；如点样带太宽，可用高极性溶剂展开至点样带上方2cm处进行浓缩，然后将铺板干燥后再用展开剂展开。？第7页/共53页 9制备色谱技术样品检测有色物质直接观察斑点；荧光物质在紫外灯下观察；无色无荧光可在荧光板分离，紫外光下显示暗斑；喷显色剂，结构稳定且不易氧化物质可以用碘蒸气显色，可逆；第8页/共53页 10制备色谱技术常用显色剂：硫酸：硫酸:乙醇(1:1)溶液，喷后110℃烤5分钟，不同有机物显不同的颜色；0.05%高锰酸钾溶液，还原性物质显黄色，背景淡红色；酸性重铬酸钾：5%重铬酸钾浓硫酸溶液，必要时150℃烤薄层；5%磷钼酸乙醇溶液：喷后120℃烤，还原性物质显蓝色，再用氨气熏，背景无色。第9页/共53页 11制备色谱技术样品收集：切割：刮刀或与真空相连的管型刮离器；回收：极性尽可能低的溶剂洗脱，通常1g吸附剂用5mL溶剂，丙酮和氯仿常用，甲醇因溶解硅胶及其中含有的杂质不常用。4型玻璃沙芯漏斗过滤洗脱液，再用?m滤膜过滤。硅胶的黏合剂以及荧光指示剂等杂质，可用Sephadex LH-20过滤纯化。第10页/共53页 12制备色谱技术常规制备TLC速度慢，效率低，如何提高？加压离心第11页/共53页 13加压制备OPLC 弹性气垫，外压使没有气相存在，展开剂强制流动，展开速度加快制备色谱技术更细的固定相颗粒、更长的薄层板第12页/共53页 14离心制备CTLC 离心力加速流动相，分离速度快，操作简单，占用空间小，使用溶剂少，可反复使用，可进行梯度洗脱，进样量大，一次分离量0.1-0.2g.制备色谱技术第13页/共53页 15不同制备TLC方法的比较 制备色谱技术参数PTLCOPLCCTLC流动相迁移方法毛细作用加压离心薄层厚度/mm0.5-20.5-21-4分离长度/cm181812分离模式线形线形环形组分分开方法离线在线在线典型上样量/mg50-15050-30050-500分离谱带数2-52-72-12第14页/共53页 16常规柱色谱技术：可使用较大直径的色谱柱，更多的固定相，因此样品量可以更大；分离速度较慢，样品可能被不可逆吸附；不适合小颗粒的吸附剂？改进方法：减压、加压等制备色谱技术第15页/共53页 17柱色谱常用固定相(1)硅胶：官能团和分子的几何形状，对异构体的分离选择性远大于其他色谱方法。烷基卤素（FClBrI）醚硝基混合物腈叔胺酯酮醛醇酚伯胺酰胺羧酸磺酸掺杂硅胶：如硝酸银处理，对不饱和烃有好的分离效果。1%-10%的添加剂的水或丙酮溶液与硅胶混合，稍干后110℃干燥即可。制备色谱技术第16页/共53页 18(2) 健合硅胶制备色谱技术第17页/共53页 19(3) 氧化铝碱性氧化铝：其水提取液为pH9-10，常用于碳氢化合物的分离，从碳氢化合物中除去含氧化合物。