荧光衍生试剂在高效液相色谱和电泳中的应用.pptx

会计学1 衍生的目的 衍生发应方式 荧光衍生试剂的构成引 言第1页/共31页 衍生化反应方式 在线 (on line) 离线 (off line) 从衍生反应的场所来分 柱前衍生化 (pre-column derivatization) 柱上衍生化 (on-column derivatization) 柱后衍生化 (post-column derivatization) 从是否与仪器联机的角度来分 从是否形成共价键来分 标记 非标记 第2页/共31页 荧光衍生试剂的基本构成取代基荧光团（试剂分子母体）反应基团胆磺酰肼 DNS-H第3页/共31页 I 胺类化合物的衍生试剂 芳香邻二醛类 OPA 异硫氰酸酯类 FITC 酰氯类 FMOC 活性卤类 NBD-Cl N-羟基琥珀酰亚胺活性酯类 AQC 第4页/共31页 邻苯二甲醛 OPA4-氯-7-硝基-2,1,3-苯并恶二唑 NBD-Cl荧光素异硫氰酸酯FITCFMOC芴代甲氧基酰氯 6-氨喹啉基琥珀酰亚胺碳酸酯AQC常用胺的衍生试剂 分子式第5页/共31页 邻苯二甲醛 OPA 衍生分离氨基酸的色谱图J Chromatorgr. 1990,499:557第6页/共31页 集成化微流控芯片氨基酸分析仪 高等学校化学学报 2004, 25: 189~190第7页/共31页 FMOC 衍生分离氨基酸的色谱图J Chromatorgr. 1990,499:557第8页/共31页 FMOC与CEOC衍生分离氨基酸的比较Anal. Biochem 2003,313 17~27第9页/共31页 图3 CEOC 衍生胺类化合物色谱分离图（23种）图2 FMOC 衍生胺类化合物色谱分离图（23种）FMOC与CEOC衍生分离脂肪胺的比较第10页/共31页 II 醇、酚的衍生试剂 羰基氯类： FMOC CEOC 磺酰氯类: DNs-Cl 卤代三嗪类: EDTN 1-乙氧基-4-(二氯-三嗪)萘（EDTN）第11页/共31页 CEOC 衍生醇类荧光检测色谱分离分析化学 2003, 31, 62~65第12页/共31页 1.苯酚 2.对氯苯酚 3. 2,5-二甲基苯酚 4. 2,4-二氯苯酚 5. 1,4对苯二酚CEOC 衍生酚类荧光检测色谱分离第13页/共31页 III 羰基化合物的衍生试剂 肼类 DNs-H CEOC-H 氨基类 氨基甲基芘 第14页/共31页 肼和胺与羰基化合物的反应第15页/共31页 1.乳糖 2.甘露糖 3.葡萄糖 4.鼠李糖 5. 山梨糖(FL detection)咔唑-9-乙氧基羰基肼(CEOC-H)柱前衍生中性糖高效液相色谱分离第16页/共31页 IV 羧酸类化合物的衍生试剂 溴甲基类 BrMMC 哌嗪基类 DBD-Pz 重氮甲烷基类 ADAM 其它类 9-(2-羟乙基)-吖啶酮 HEA4-氨甲基-6，7-二甲基香豆素 (ADMC)7-N-哌嗪-4-二甲氨基苯并呋喃9-蒽重氮甲烷9-蒽重氮甲烷(4-溴甲基-7-甲氧基香豆素)第17页/共31页 荧光衍生试剂与羧酸的反应第18页/共31页 4-氨甲基-6,7-二甲基香豆素 (ADMC) 衍生羧酸 色谱分离图第19页/共31页 Fig.1 胆汁酸分离色谱图（荧光检测）. 衍生物的激发和发射波长分别为 ?ex=404, ?em=440nm9-(2-羟乙基)-吖啶酮 HEA 衍生胆汁酸 色谱分离图第20页/共31页 V 分离对映体的手性荧光衍生试剂 第21页/共31页 Toshimasa Toyo’oka Japan 手性荧光衍生试剂 R(-)DBD-PyNCS 衍生分离DL氨基酸第22页/共31页 OPA 与手性硫醇 衍生分离DL氨基酸N-异丁酰基-D(L)-半胱氨酸 (IBDC和IBLC)第23页/共31页 VI 蛋白质的衍生试剂目前常用衍生蛋白质的荧光标记试剂有： 邻苯二甲醛 (OPA) 4-氟-7-硝基苯并恶二唑 (NBD-F) 荧光素异硫氰酸酯 (FITC) 3-呋喃甲酰喹啉-2-羰醛 (FQ)第24页/共31页 邻苯二甲醛 OPA 衍生马心肌红蛋白质毛细管电泳分离Fig.5 OPA 柱后标记马心肌红蛋白质毛细管电泳图第25页/共31页 3-呋喃甲酰喹啉-2-羰醛 FQ 衍生蛋白质毛细管电泳分离第26页/共31页 VII 核酸的衍生试剂DNA序列分析中所用的四种荧光衍生试剂Nature 1986,327: 674第27页/共31页 DNA 测序仪及电泳图第28页/共31页 展 望分析化学中的有机试剂在分析化学中占有与分析仪器同等重要的地位，荧光衍生化试剂则是有机分析试剂的一类重要分支。 性能优良的荧光衍生化试剂可能将