荧光分析测定维生素c.pptx

会计学;一、维生素 C及维生素的测定原理;二、荧光分析法测定维生素 C实验 ;1. 2 实验步骤 ? （1）配置待测样品及空白对照 　 在 25 mL 比色管中依次加入 0. 6 m L CuSO4 溶液，2. 0 m L十六烷基三甲基溴化铵溶液，2. 0 m L 苯 甲酸溶液 ，一定体积的维生素 C 标准溶液 ，5. 0 mL NaOH -邻苯二甲酸氢钾缓冲溶液, 用蒸馏水定容，摇匀；以不含维生素 C 溶液为 空白对照。 （2）水浴加热 在 35℃恒温水浴中加热 30 m in， 将溶液流水 冷却至室温 。 （3）荧光分析 将待测样品放置于样品架上，设定激发波长为 308 nm ，发射波长为 408 nm ，测量荧光强度 F ，以不含维生素 C 的试剂空白为 F0 ，计算 F测 =F - F0 。;2 结果与讨论 ? 2. 1 激发光谱和发射光谱 ? 　　取 3. 0 mL 维生素 C 标准溶液, 按实验方法进 行操作,分别在 290 ～ 330 nm、360 ～ 460 nm 内扫描 得到激发光谱和发射光谱如图 1、图 2所示。从图 1、图 2中可看出 ,当激发波长为 308 nm , 发射波长 为 408 nm 时体系的荧光强度最大,试剂空白的荧光 值比较低且稳定, 故本实验选择激发波长为 308 nm ,发射波长为 408 nm 。 ? ;2. 2 试剂加入顺序 ? 　　按照实验方法操作, 在各试剂加入量相同的情况下, 试验了试剂的不同加入顺序对荧光强度的影 响。试验结果表明, 当所加试剂顺序依次为 CuSO4 溶液、苯甲酸溶液、维生素 C 标准溶液、NaOH -邻 苯二甲酸氢钾缓冲溶液时 ,体系的荧光强度最大，因此选用此加入顺序为最佳试剂加入顺序。; 2. 3 缓冲溶液 　　 溶液的pH值对体系荧光强度有较大的影响，试验了不同的pH值对荧光强度的影响。由pH值 —荧光强度的曲线可知 , 当 pH 值为 5. 9 ～ 6. 2 时 ,荧光强度达到最大值且比较稳定 ,因此确定最佳 pH 值为 6. 0。 　　缓冲溶液的种类对体系的荧光强度也有一定的影响。试验了以下几种 pH 值为 6. 0 的缓冲溶液 : NaOH - KH 2 PO4 、KH2 PO4 - 硼砂、KH2 PO4 - Na2 H PO4 、NaOH - 邻苯二甲酸氢钾、Na2 H PO4 - 柠檬 酸、NaOH -柠檬酸钠、HA c - NaA c等。试验结果表明 ,当所加的缓冲溶液为NaOH -邻苯二甲酸氢钾时,荧光强度最大且稳定。因此本实验选择NaOH - 邻苯二甲酸氢钾为缓冲溶液 ,其最佳用量为 5. 0 m L。 2. 4 加热温度和加??时间 　　 试验了不同温度对体系荧光强度的影响。结果表明, 当加热温度为 35℃时，既有利于提高体系反应速度，又不使反应物与产物结构受到破坏。改变 加热时间进行试验, 结果发现，在 35℃水浴中加热30 m in，体系荧光强度达到最大值且相对稳定。 ? ;2. 5 硫酸铜和苯甲酸的用量 　　其它条件不变，试验了硫酸铜和苯甲酸的用量对体系荧光强度的影响。结果表明，当硫酸铜的用量为 0. 6 m L、苯甲酸的用量为 2. 0 mL 时，体系荧光强度最大。 2. 6 表面活性剂 　　 分别试验了十六烷基三甲基溴化铵 (CTMAB)、 十二烷基磺酸钠及 β -环糊精对体系荧光强度的影响。结果表明 ,表面活性剂对体系的荧光强度有一定的增敏效果，其中 CTMAB 对体系的增敏效果最 好。进一步试验了 CTMAB 的用量对体系的荧光强度的影响, 当 CTMAB 的用量为 2. 0 m L 时, 体系荧光强度最大。 ;三、荧光分析法测定维生素 C 应用 ; 样品测定结果列于表 3表 3 样品测定结果(n =3)。由表3可知，用荧光分析法测定维生素C药片、西红柿和果珍中维生素C的含量，回收率为96. 7% ～ 100. 5%准确度较高。;谢谢观赏！ ; 利用某些物质受光照射时所发生的荧光特性和强度，进行物质的定性分析或定量分析的方法，称为荧光光谱分析。