基因工程基本操作程序.pdfVIP

P7 思考与探究 2、为什么细菌中限制酶不剪切细菌本身的DNA？ 细菌中限制酶之所以不切断自身DNA，是因为 微生物在长期的进化过程中形成了一套完善的防 御机制，可以将外源 的DNA降解掉。生物在 长期演化过程中，含有某种限制酶的细胞，其 DNA分子中不具备这种限制酶的识别切割序列， 或者通过甲基化酶将甲基转移到所识别序列的碱 基上保护起来，使限制酶不能将其切开。 3、天然的DNA分子可以直接用做 工程 载体吗？为什么？ 提示： 工程中作为载体使用的DNA分子很多都是质粒 （plasmid），即独立于细菌拟核 DNA之外 的一种可以自我 、双链闭环的 露的DNA分子。 是否任何质粒都可以作为 工程载体使用呢？ 不是，作为 工程使用的载体必需满足以下条件： 1）载体DNA必需有一个或多个限制酶的切割位点，以便目的基 因可以插入到载体上去。 2）载体DNA必需具备自我 的能力，或整合到受体 DNA上随 DNA的 而同步 。 3）载体DNA必需带有标记 ，以便重组后进行重组子的筛选。 4）载体DNA必需是安全的，不会对受体细胞有害，或不能进入 到除受体细胞外的其他生物细胞中去。 5）载体DNA分子大小应适合，以便提取和在体 行操作，太 大就不便操作。 实际上自然存在的质粒DNA分子并不完全具备上述 条件，都要进行人工改造后才能用于 工程操作。 1.2 工程的基本操作程序 目的 的获取 即：将需要的 从供体生物细胞内提取出来 编码蛋白质的 目的 主要是指______________ ___ 供体生物细胞 目前被广泛提取使 用的目的 有：苏 取出 云金杆菌抗虫 、 DNA 植物抗病 （抗病 用限制酶剪 去多余部分 毒、抗细菌)、人胰岛 素 等。也可以是 一些具有调控作用的 目的 因子 (一) 从 文库中获取目的 阅读 P9 1. 文库的概念: 将含有某种生物不同 的许多DN 断，导入到受体菌的 群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同 。 2. 文库的种类: 组文库： 文库中含有一种生物的全部 部分 文库： 文库中只包含了一种生物的部分