细胞膜的渗透性_液泡系的活体染色.ppt

实验三 细胞膜的渗透性 液泡系的活体染色 实验目的 通过红细胞的溶血过程的观察,了解细胞膜的渗透性及各种物质对细胞膜渗透性的影响; 掌握细胞活体染色的原理和技术 实验原理 细胞膜的渗透性 红细胞在低渗液中，细胞很快吸水而胀裂，称为溶血。 在等渗液中，由于有些溶质会进入红细胞内、引起细胞渗透压升高，细胞也会吸水胀裂，由于各种物质透入细胞的速度不同，溶血的时间不同。 实验中溶血现象的判断是以光线能否透过溶液来界定的 液泡系的活体染色 液泡是细胞内浓缩产物的主要场所，具有重要的功能。 中性红是液泡的特殊染色剂，对于活细胞，只将液泡染成红色,细胞质和细胞核不会被染色。 不同分子对人工磷脂双层的通透性 易通过质膜 气体分子（如O2、CO2、N2） 小的不带电的极性分子(如尿素、乙醇) 脂溶性的分子等 难以通过质膜 大的不带电的极性分子（如葡萄糖） 各种带电的极性分子 实验用品 实验材料 10%兔血细胞,黄豆根尖 实验试剂 1/3000中性红溶液、生理盐水 等渗液：①0.17mol/L氯化钠；②0.32M 甲醇； ③0.32M 乙醇； ④ 0.32M 丙醇；⑤0.32M 乙二醇； ⑥ 0.32M 甘油；⑦ 0.32M 葡萄糖 实验器材 显微镜、解剖盘、剪刀、镊子、载玻片、盖玻片、注射器、吸管、试管、试管架、秒表、刀片等 实验内容 细胞膜的渗透性(兔红细胞) 液泡系的活体染色（黄豆根尖） 实验步骤 细胞膜的渗透性(兔红细胞) 血细胞悬液的制备 取1mL兔的抗凝全血于50mL小烧杯(或10ml试管)中，再加入9mL 0.17 mol/L氯化钠，稀释兔血制成兔的红细胞悬液，观察它的特点为一种不透明的红色浑浊液体； 观察红细胞在低渗溶液（水）中发生的溶血现象 取1支试管加入10ml蒸馏水，再加入1ml红细胞悬液，摇动2次混匀，可见溶液由不透明的红色迅速变成红色澄清液； 显微镜下观察溶血前后红细胞的形态变化; 红细胞对不同溶质渗透性的观察： 取试管一支，加入0.17mol/L氯化钠溶液10ml，再加入1ml稀释的兔血，轻轻摇动，注意颜色有无变化？有无溶血现象？为什么？ 取6支试管贴上标签，依次加入下列等渗溶液10ml：①0.32M 甲醇; ②0.32M 乙醇; ③0.32M 丙醇; ④0.32M 乙二醇; ⑤0.32M 甘油; ⑥0.32M 葡萄糖 向每支试管加入1ml红细胞悬液，摇动2次混匀，观察是否有溶血现象发生，记下溶血时间(自加入稀释兔血到溶液变成红色至透明澄清所需时间)。 实验步骤 植物液泡系的活体染色 取一干净载玻片，滴一滴1/3000中性红染液； 用刀片将初生的黄豆根尖（约1－2cm长）切一纵薄片，置染液中，染8分钟； 用吸管吸Ringer液或蒸馏水滴在染液周围，使染液冲淡，吸去再换水使染液近无色； 用盖玻片盖在样品上，吸去周围多余水份； 观察：在高倍镜下，先观察分生区细胞，寻找染成红色的圆形液泡，这是初生的幼小液泡；由分生区向伸长区观察，在长方形细胞中寻找染色较浅，体积增大的液泡；在根毛区寻找体积更大的液泡，有的占据胞质大部分，将细胞核挤至一侧。 实验结果 实验结果 实验报告 实验报告 2.血红细胞的渗透性实验中，是否存在物质跨膜的主动运输现象？为什么？ 3 .黄豆根尖经中性红超活染色，为什么看到生长点的细胞中液泡多，而且染色深，延长区细胞中液泡数量变少，染色浅？ 思考题 溶液的渗透压主要与哪些因素有关?对简单盐溶液如何粗略计算出其渗透压? 通过实验，你认为葡萄糖能否作为调节分离细胞渗透压的渗透剂？为什么？ 渗透压计算 稀溶液的渗透压可根据范荷夫公式计算： P=iCRT 参数说明 C：溶液的摩尔浓度； R：气体常数（0.083升·巴摩尔-1·度-1）； i：渗透常数，i=1+（n-1）α；n：1分子解离后所得离子数，α：电离度； T：绝对温度 对非电解质溶液，其渗透浓度等于溶液的物质的量浓度 对于电解质溶液，其渗透浓度等于溶液中离子的总物质的量浓度 甲醇 ： MV:32.04， 结构简式： CH3OH 乙醇: MV:46.07， 结构简式： CH3-CH2-OH, 丙醇: MV:60.10，结构简式：CH3-CH2-CH2-OH 乙二醇：MV:62.069 ，结构简式：HO-CH2-CH2-OH 甘油: MV:92.09, 结构简式： HO-CH2-CHOH-CH2OH 葡萄糖：MV：180 氯化钠 ： * 细胞生物学实验 * 细胞生物学实验 溶血现象(左) 黄豆根尖纵切示液泡（ 中性红染色） N 0.32M 葡萄糖 8 11m12 0.32M 甘油 7 3m20 0.32M 乙二醇 6 62 0.32M 丙醇 5 41 Y 0.32M 乙醇 4 35