植物组织过氧化氢含量的测定.doc

配制100ml、100umol/L的过氧化氢溶液需要多少30%的过氧 化氢原液？请写出计算过程。 答：第一计算其摩尔浓度： 若30%为其质量百分数 双氧水30%浓度的试剂（国药公司出品），室温时实测密度 为：1,122g/L，所以，1L30%含量的双氧水中过氧化氢含量 为：1122g/L×1L×30%=337g 又H2O2的分子量为34.0146，那么1L30%含量的双氧水中过氧化氢浓度为：337/34.0146=9.908mol/L. -3-6 100ml×10×100umol/L×10=9.908mol/L×V -6 V=10L=1ul 若30%为体积分数 100%H2O2密度是1,440g/L,30mlH2O2的质量为1440g/L×30ml×10-3=43.2g，30%含量的双氧水中过氧化氢浓 度为：43.2/34.0146/0.1=12.7mol/L. 100ml×10-3×100umol/L×10-6=12.7mol/L×V V=7.9×10-7L=0.79ul 1/3 植物组织中过氧化氢含量测定 植物在窘境下或衰老时，因为体活性氧代增强而使H2O2发生积累。H2O2能够直接或间接地氧化细胞核酸，蛋白质等生物大分子，并使细胞膜遭到伤害，进而加快细 胞的衰老和解体。过氧化氢酶能够消除H2O2，是植物体重要的酶促防守系统之一。 所以，植物组织中H2O2含量和过氧化氢酶活性与植物的抗逆性亲密有关。本实验用 分光光度法测定过氧化氢含量，利用高锰酸钾滴定法和紫外汲取法测定过氧化氢酶 活性。 [原理] H2O2与硫酸钛（或氯化钛）生成过氧化物—钛复合物黄色积淀，可被H２SO4溶解 后，在415nm波长下比色测定。在必定围，其颜色深浅与H2O2浓度呈线性关系。 [仪器和器具] 研钵；移液管0.2ml×2支，5ml×1支；容量瓶10ml×7个，离心管5ml×8支； 离心计；分光光度计。 [试剂] 100μmol/LH 2 O丙酮试剂：取 30%剖析纯HO57μl，溶于100ml，再稀释100 2 2 2 倍；2mol/L硫酸； 5%（W/V）硫酸钛；丙酮；浓氨水。 [方法] 制作标准曲线：取10ml离心管7支，次序编号，并按表加入试剂。 测定H2O2浓度标准曲线配置表 试剂（ml） 离心管号 1 2 3 4 5 6 7 100μmol/LH2O2 0 0.1 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 4℃下预冷丙酮 1.0 0.9 0.8 0.6 0.4 0.2 0 5%硫酸钛 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 浓氨水 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 3000r/min 离心10min，弃去上清夜，留积淀 2mol硫酸 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 待积淀完整溶解后，将其当心转入10ml容量瓶中，并用蒸馏水少量多次冲刷离心管，将清洗液归并后定容至10ml刻度，415nm波长下比色。 2. 样品提取和测定：(1)称取新鲜植物组织 2g，按资料与提取剂1∶1 的比率加 入4 ℃下预冷的丙酮和少量石英砂研磨成匀浆后，转入离心管 3000r/min 下离心 10min，弃去残渣，上清液即为样品提取液。 (2)用移液管汲取样品提取液 1ml，按 表1 加入5%硫酸钛和浓氨水，待积淀形成后5000rpm/min 离心10min，弃去上清液。 积淀用丙酮频频清洗3～5次，直到去除植物色素。(3)向清洗后的积淀中加入2mol硫酸5ml，待完整溶解后，与标准曲线相同的方法定容并比色。 结果计算： CVt 植物组织中H2O2含量(μmol/gFw)=FWV1 2/3 式中C—标准曲线上查得样品中H2O2浓度（μmol）； Vt—样品提取液整体积（ml）； V1—测准时用样品提取液体积（ml）； FW—植物组织鲜重（g）。 、实验结果: 1 2 3 4 5 6 7 H2O2浓度 0 0.1 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 吸光度A 0 0.049 0.126 0.315 0.425 0.625 0.778 得出标准曲线如以下列图： 过氧化氢与吸光值关系的标准曲线 0.9 0.8 y=0.7643x 0.7 R2=0.9942 0.6 值0.5 光0.4 吸 0.3 0.2 0.1 0 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 100umol/L过氧化氢量体积（ml） 测定所得样品的吸光度为 0.188，带入得 0.2459，考虑到称取鲜重 2.116g代入 公式含量为H2O2=0.116μmol/gFw。 须知 1、离心计离心时应当先配平。 2、加试剂的次序必定不能够错。 3、每次加完一种试剂后都要充分摇匀。 4、注意所用H2O2的浓度。 3/3