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ppo酶活性测定方法
超氧阴离子一氧化物合酶(PGO)活性测定法是一种常用的用于评估细胞氧化损伤的一种方法,也可以用于检测抗氧化剂的活性。PGO作为细胞内氧化应激反应的中心,其反应产物还可影响细胞凋亡、炎症反应等。
超氧阴离子合酶活性测定方法是以酶活性反应产物形成荧光为基础,使用磷酸二酯酶催化发光试剂,实现超氧降离子合酶酶活性和氧化损伤程度测量。
仪器设备:微孔板,新鲜实验室常用试剂,高速冷冻离心机,气相色谱仪(特别适用于测定多环芳烃),荧光检测仪,微粒检测仪,室温恒温摇床等。
实验步骤:
1. 将被测物经无菌操作后分装2-100ug每管,用室温恒温摇床振荡一小时以上使物质充分溶解。
2. 样品检测:采用气相色谱仪(GC)和微粒检测仪(DP)检测样品的组分及其量。
3. 根据检测数据,确定试验的反应条件,将样品应激至规定的条件下进行测定。
4. 酶活动测定:在准备好的样品解暴管中,加入磷酸二酯酶发光试剂(包括盐酸、钠,KMnO4等),调节pH值至7.4,在37℃振荡10min。
5. 用荧光检测仪(FL)检测样品的荧光强度,以计算出超氧降离子合酶酶活动和氧化损伤程度。
6. 分析结果:用相应数据软件绘制超氧阴离子合酶活性曲线,以得出超氧阴离子合酶活性及氧化损伤程度。
以上是超氧阴离子合酶活性测定方法的具体步骤。由于是一种涉及荧光反应的方法,精密设备及荧光诱导剂的选择非常重要,以实现准确的测定结果。因此,在使用这种方法时,应特别注意荧光检测仪、气相色谱仪等仪器的精准度,以及试剂的质量和测定条件的控制,以保证实验的准确性和准确性。
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