药敏试验方法及操作规程！.docx

试验方法 1、快速药敏试验：采取病料后直接涂布进行药敏试验，与病原菌分离同时进行，可根据药敏结果初步进行治疗。此种方法适用于发病初期病料组织，8-16小时可快速出具检测结果。 2、前增菌培养法药敏试验：前增菌培养法耗时略长，需要2-3天的时间，先对细菌增菌培养后再进行药敏试验。此种方法可避免快速药敏试验由于无细菌生长或细菌生长较少、抑菌圈不明显等而导致不能及时读取结果的情况出现。 3、传统法药敏试验：传统法耗时较长，需要3-4天的时间，对于一般养殖场定期监测病原菌及其敏感性时可以使用此方法。能较好地分离出病原菌，病原菌经纯培养后，进行药敏试验，得出的数据可以准确反应出病原菌对某一药物的敏感性。 操作方法 1、快速药敏实验 （1）样品处理：用烧灼的灭菌刀片烫灼组织表面杂菌，无菌操作用剪刀剪取组织，置于灭菌平皿中，滴加适量生理盐水，剪碎并混匀组织，呈糊状最佳。 （2） 涂板：用灭菌棉签沾取病料组织混悬液，均匀涂抹于 营养琼脂平板上，反复2次，每次将平板旋转60度，最后沿周边绕两圈，确保涂抹均匀。 （3） 贴药敏纸片及培养：用镊子夹取药敏纸片平放在琼脂平板上，并轻压使紧贴于琼脂平板表面，药敏纸片一旦接触培养基表面不要再移动。在培养基中央贴一片，外周以等距离贴若干种纸片，一个平板（直径90毫米）可贴6-7个抗菌药敏片，并标记每个药敏片的药名。贴好纸片的平板于37℃培养16-24小时观察结果。 2、前增菌培养法药敏实验 （1） 样品处理：用灭菌棉签沾取组织内部，然后打开装有增菌液（ 营养肉汤?）的试管，使棉签与增菌液混合，反复挤压5次，取出棉签过火焰烧灼灭菌弃掉。试管口和试管塞过火焰灭菌，盖上试管塞，做好标记，放入恒温箱中37℃培养12-24小时，此肉汤菌液为前增菌液。 （2） 涂板：用灭菌棉签沾取前增菌液或稀释后增菌液，在管壁轻碰几下，挤掉多余水分，均匀涂抹于营养琼脂平板上，反复2次，每次将平板旋转60度，最后沿周边绕两圈，保证涂均匀。 （3） 贴药敏纸片及培养：用镊子夹取药敏纸片平放在琼脂平板上，并轻压使紧贴于琼脂平板表面，药敏纸片一旦接触培养基表面不要再移动。在培养基中央贴一片，外周以等距离贴若干种纸片，一个平板（直径90毫米）可贴6-7个抗菌药敏片，并标记每个药敏片的药名。贴好纸片的平板于37℃培养16-24小时观察结果。 3、传统药敏实验 （1） 样品处理：用烧灼的灭菌剪刀烫灼组织表面杂菌，用剪刀在病料组织中剪开一切口，用棉签或接种环沾取组织病料，进行细菌分离，培养16-18小时后挑取接种平皿中菌落，置于无菌1.5ml离心管中，滴加500ul生理盐水，混匀菌落。注意同时对分离细菌和进行药敏实验菌落进行染色，确定为同种致病菌。 （2） 涂板：用灭菌棉签沾取菌落混悬液，均匀涂抹于营养琼脂平板上，反复2次，每次将平板旋转60度，最后沿周边绕两圈，保证涂均匀。 （3） 贴药敏纸片及培养：用镊子夹取药敏纸片平放在琼脂平板上，并轻压使紧贴于琼脂平板表面，药敏纸片一旦接触培养基表面不要再移动。在培养基中央贴一片，外周以等距离贴若干种纸片，一个平板（直径90毫米）可贴6-7个抗菌药敏片，并标记每个药敏片的药名。贴好纸片的平板于37℃培养16-24小时观察结果。 观察结果及判定标准 1、说明：经培养后，凡对涂布的细菌有抑制能力的抗菌药物，在其纸片四周出现一个无菌生长的圆圈，称为抑菌圈。可用直尺测量其抑菌圈的大小，抑菌圈越大，说明该菌对此种药物敏感性越大，反之越小。若无抑菌圈，则说明该菌对此药具有耐药性。 2、判定标准：根据《抗微生物药物敏感性试验执行标准2010》中的判断标准进行判断，对于商品药物，抑菌圈直径＞20mm为极敏，15-20mm为高敏，10-14mm为中敏，＜10mm为低敏，0为耐药。 3、注意事项 （1）制备纸片的滤纸要求吸水性好，均匀不含无关的化学物质或色素。 （2）干燥的药敏纸片必须在密封，放有干燥剂的容器中存放，以防受潮。 （3）药敏纸片制备后立即用敏感细菌作药敏试验，并记录其抑菌圈，每月复查一次。 （4）培养基要求是适合常见致病菌生长，不含被试药物的拮抗剂。 （5）培养基厚度对抑菌圈大小有直接影响，要求3-4mm厚的平板。 （6）培养基PH值对某些药物抑菌区影响很大，一般PH应为7.2-7.4。 说明：转载只为分享目的，如有侵权请联系删除，谢谢！