CCK-8的实验过程注意细节.docx

普遍认为，CCK-8是操作更简单、数据更稳定、灵敏度也较高的细胞增殖与毒性检测方法。CCK-8实验过程简单总结为配置细胞悬液、加入待测物质、待测物质与细胞共同孵育一定时间、加入CCK-8、测定吸光度五步。但其中仍有需要注意的地方，值得探讨学习。 CCK-8的实验过程注意细节 01 配置细胞悬液 a. 如果是第一次做或者第一次种此类细胞，建议先做几个孔去摸索接种数量和培养时间； b. 细胞悬液一定要混合均匀，避免其沉淀导致每个孔的细胞数量不一样。 建议在培育时间内不要让细胞长得太满，其一无法判断是否堆积生长会影响药物进入细胞进而影响OD值，其二生长不均匀会导致孔间OD值偏差较大，影响最终结果。 02?加入CCK-8溶液后孵育的时间 孵育时间与细胞类型和种植细胞的密度是正相关的，建议设定一系列梯度时间分别进行监测，选取吸光度范围比较适宜的时间点用于后续的实验。 此外，考虑到孵育过程每孔蒸发量不一样，所以在加CCK-8时，可以将旧的培养基吸出，然后加入新鲜的培养基与CCK-8混匀液（100：10），再进行检测。 03?OD值的检测 影响OD值的因素很多，比如细胞密度、孵育时间、检测时孔里有气泡等。 a. OD值过高可以适当减少细胞数量和缩短共同孵育时间； b. OD值过低则可以适当增加细胞量与延长加入 CCK-8试剂后的反应时间。 建议将OD值控制在1.0左右附近，酶标仪与UV的原理类似，都有一个最佳的检测范围超过了这个范围数据就会不稳定，因此为了避免读数不准确要根据自己的数据范围设定具体的实验细节。 来源：“金沙生物”公众号?? ?说明：转载只为分享目的，如有侵权请联系删除，谢谢！