免疫组织化学-PPT幻灯片.ppt

是指用已知的抗原或抗体去检测待检组织中的抗体或抗原，抗原抗体结合后再用一系列呈色反应，在光镜下观察，确定组织的来源、属性和部位。 目前免疫组织化学已成为科学研究及病理诊断中最重要的手段之一，而且已经普遍地展开并扩展至基层单位，为病理事业做出应有的贡献。;抗原（抗原，AG）;㈠抗原的性质;㈡抗原的类型 ;㈢抗原的纯化 ;抗体（抗体, AB）;1.多克隆抗体(Polyclonal抗体,PCAB) 此类抗体成份较多，是多种单克隆抗体的混合物，可以跟抗原的多个决定簇起反应，故称多克隆抗体。 2.单克隆抗体（Monoclonal抗体, MCAB） 只能跟抗原中的某个决定簇起反应而获得的抗体称单克隆抗体。;二、免疫组织化学技术的发展概况;㈠免疫荧光细胞化学技术 ;常用的荧光标记法;②间接法：基本原理是用特异性的抗体与切片中的抗原结合后，继用间接荧光抗体，与前面的抗原抗体复合物结合，形成抗原抗体荧光复合物。 评价：本法发出的荧光亮度强，敏感性强。适用于多种第一抗体的标记显示，目前本法应用较广泛。但制作好的切片不能长期保存，影响资料的积累。;㈡免疫酶细胞化学技术 ;㈡免疫酶细胞化学技术;㈡免疫酶细胞化学技术;㈢非标记抗体酶法 ;㈢非标记抗体酶法;㈣卵白素-生物素复合物法(ABC法);㈣卵白素-生物素复合物法(ABC法);㈣卵白素-生物素复合物法(ABC法);㈤碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶法（APAAP法);㈤碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶法;㈤碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶法;㈥免疫金银法（IGSS） ;㈥免疫金银法;㈦LSAB法或SP法;㈦LSAB法或SP法;㈦LSAB法或SP法;㈧二步法EnVision Systems ;㈧EnVision TM Systems;三、常用免疫组织化学染色方法 ;㈠ABC法 ;(一)ABC法;(二)LSAB法 (SP法) ;(三)二步法Envision Systems ;四、抗原修复 ;为什么要进行抗原修复？;用什么方法进行抗原修复？;(一)真空负压抗原修复法;(一)真空负压抗原修复法;(二)微波辐射抗原修复法;(二)微波辐射抗原修复法;(三)高压抗原修复法;(三)高压抗原修复法;(四)隔水热抗原修复法;(四)隔水热抗原修复法;(五)电炉加热抗原修复法;(五)电炉加热抗原修复法;五、做好免疫组织化学必须注意的问题;组织固定越新鲜越好。 组织脱水必须彻底干净。 切片必须??整、均匀、平展、无皱折。 切片的附贴必须牢固，使用合适的粘贴剂。 切片必须烘烤附贴牢固，既要经得起抗原修复时高温的作用而不脱片，又不至于破坏抗原。 切片脱蜡必须干净，否则将会影响结果。;注意事项;六、免疫组织化学在临床病理诊断中的应用;(一)免疫组化常用抗体标志物;Ⅰ 上皮性标志物;胃腺癌CK8阳性;2.上皮膜抗原(epithelial membrane antigen EMA);乳腺小叶增生EMA阳性;Ⅱ非上皮性标志物 ;1.波形蛋白（Vimentin）;恶性纤维组织细胞瘤Vimentin阳性;2.肌组织标志物;胃黏膜肌层Desmin阳性;平滑肌肉瘤SMA阳性;扁桃体外横纹肌Actin-Sarcomeric阳性;3.内皮细胞及其肿瘤标志物;血管F8因子阳性;小血管内皮细胞CD34阳性;4.组织细胞标志物;肝脏kupffer细胞 CD68 AEC染色;恶性纤维组织细胞瘤 溶菌酶 AEC染色;Ⅲ淋巴造血组织标志物;扁桃体CD3（T细胞标志物）;扁桃体CD20(B细胞标志物);霍奇金淋巴瘤 CD15 R-S细胞标记物;Ⅳ神经源性肿瘤标志物;脑胶质瘤GFAP;Ⅳ神经源性肿瘤标志物;恶性黑色素瘤S-100;Ⅳ神经源性肿瘤标志物;脑胶质瘤NF;4.神经特异性烯醇化酶NSE 及嗜铬素A(CgA)： 嗜铬细胞瘤、副神经节瘤、类癌、尤文肉瘤、Merkel细胞瘤。 甲状腺髓样癌、肺小细胞癌等。 ;胃神经内分泌癌CgA;Ⅴ其它;恶性黑色素瘤HMB45;(二)常用抗体细胞内准确定位;(1)细胞膜：;HER-2;(2)细胞核：;ER;(3)细胞质：;PCK;(三)免疫组织化学在肿瘤病理学中的应用;1.低分化恶性肿瘤的诊断及鉴别诊断;2.确定转移性恶性肿瘤的原发部位;3.确定肿瘤的组织来源;4.淋巴瘤的诊断及分型;如：淋巴结反应性增生：CD20+，CD3+，κ，λ 双项表达，bcl-2(-) 滤泡性淋巴瘤：CD20+，CD3-，κ，λ 单项表达，bcl-2(+);间变性大细胞淋巴瘤：CD30+，ALK+(T/B) 弥漫性大B细胞淋巴瘤：CD20+，CD79а+，CD3-，CD45RO-，ALK（-）;5.为临床判断患者预后及制定治疗方案提供参考;乳腺导管内癌ER ( 雌激素受体);乳腺浸润性导管癌PR(孕激素受体);②肿瘤细胞增殖活性标记物PCNA、Ki-