急性毒性试验设计课件.ppt

急性毒性试验设计急性毒性指人或动物一次或24 h之内多次接触外源化学物后，在短期内所发生的毒性效应，包括致死效应。 一次：指瞬间给实验动物染毒，如经口、经静脉注射染毒。24 h 之内多次：指外源化学物毒性过低，需给予动物较大剂量。 急性毒性效应出现的快慢和毒性反应的强度与外源化学物的性质和染毒剂量的大小有关。如：丙烯腈，过氧化二碳酸二环己酯 丙烯腈经口急性毒性试验设计 实验目的评价丙烯腈的毒性作用，求出半数致死量LD 并根据LD 进行急性毒性分级nnn50，50，掌握实验动物随机分组的方法和经口灌胃的技术。观察丙烯腈急性中毒症状；为后续试验提供依据；为毒理学机制研究提供线索。 器材与试剂1、实验动物 ICR小鼠（健康成年小鼠）n2、实验器材 灌胃针、注射器、吸管、容n量瓶、烧杯、滴管、电子天平、动物体重秤、外科剪刀、镊子3、实验试剂 丙烯腈、苦味酸酒精饱和液、伊红染液n 实验方法1、实验动物的选择n2、剂量设计及随机化分组n3、受试物的配制n4、染毒途径的选择n5、毒性反应的观察与LD50的计算n6、急性毒性的评价n 一、 实验动物选择1、物种和品系对外源化学物毒性反应与人近似易于饲养管理方便实验 操作易于获得繁殖生育力 强数量较大能够保障品系纯化，价格低廉。 2、 实验动物的年龄与体重动 物　　 大鼠 小鼠 豚鼠 兔　 犬猫成年年龄（周） 3 22 3~4 3~4 3~4150 15 250 1.5kg 7~15kg 1kg2~3 2~3 6~8 4~9 15~20 10~12体重（克）寿命（年） 3、实验动物的一般要求动物数量：动物6组，1-5组为实验组，6组为生理与健康状况：未产未孕者、健康动物nn实验动物的预检n蒸馏水对照组实验动物的给药前禁食处理。n性别：雌雄各半nn年龄：成年动物 健康动物标志发育正常、体态丰满、外观无畸形；被毛浓密、贴顺有光泽、不蓬乱；胸阔宽阔、脊柱不弓不弯；眼睛明亮；表皮无溃疡、无结痂（注意尾巴）；各天然孔干净、无分泌物；行动灵活、反应敏捷。 实验动物的标记染色法编号方法：小鼠头部为1号，顺时针编号，用苦味酸编个位数，用伊红编十位数。 染色法优点：简单方便，不痛苦，无损伤。缺点：时间较长时，染色剂易褪色；标记容易模糊不清。 剂量选择及分组剂量选择n广泛查阅文献资料，估计毒性中值ü预试，求出待测化学物0 %~100 %或ü10 %~90 %的大致致死剂量范围设计正式试验的剂量和分组ü 预实验：总的原则是先用少量动物，以较大的剂量间距染毒，求出粗略的致死剂量范围，即确定受试动物全部致死的最小剂量（b）和全部不致死的最大剂量（a），即求出待测化学物0 %~100 %的大致致死剂量范围，然后在这个剂量范围内按几何级数的间距设计5~7个剂量组，组间剂量呈等比级数（r），其比值为1.2~1.5。进行正式实验。 通过预试，找出受试化学物引起动物死亡的大致剂量范围，以此为依据设计正式试验的剂量和分组。按下式设计剂量组：式中：r—相邻两组剂量的比值，一般为1.2～1.5，b—最低全致死剂量量，a—最高不致死剂量，n—设计的组数。分组恰当与否也是确保实验结果准确的条件之一。因为组数过多，需要消耗较多的动物，还可能出现较大剂量组动物死亡率低于较小剂量组；组数过少，不能较精确求出LD 50。 根据公比(r)计算各组剂量各组剂量分别为第一组：a第二组：a r第三组：a r2第四组：a r3第五组：a r4第六组：a r5 随机化分 组将实验动物编号，从随机数字表上任意横行或纵行的任意数字开始，顺序取下数字，标于每个动物号下，然后用计划组数去除随机数字，所得余数即为所属组别。 以20只动物的完全随机分配为例动物编号随即数字除4后余数12345678910 11 12 13 14 15 16 17 18 19 2054 83 80 53 90 75 53 78 93 47 72 09 54 66 95 44 68 67 67 8623012312130122300332所属组别二三 四 一 二 三 一 二 一 三 四 一 二 二 三 四 四 三 三 二 完全随机分配后各组所属动物号组别动物编号一二417598121320181419三四2361016151711 20只动物完全随机分配的结果组别动物编号三12813151418610四311161720 受试物的配制方法（1）受试化学物的量取：固体受试物用称量法，液体受试物用称量法或吸量法。n称量法：取一定量的受试物放入已知重量的容器内，称重，n定容，计算浓度mg/ml，备用。吸量法：依设计剂量计算出应吸取液态受试物的容积，加入n容量瓶中，用溶剂加至刻度。 A · V吸量法，计算公式为：X＝d×1000式中：X——应吸取受试物的容积；A——设计要求的受试物