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其他致病菌的检验第1页/共22页 第六章 食品中病原菌的检验 第五节 其他致病菌的检验 食品中蜡样芽孢杆菌的检验第2页/共22页 一、生物学特性 （一）、形态与染色 革兰氏阳性大杆菌，芽胞不突出菌体，菌体两端较平整，多数呈链状排列，周身鞭毛，有动力。荧光染色的铜绿假单胞杆菌和蜡样芽孢杆菌 用孔雀绿染色的蜡样芽孢杆菌芽孢 用孔雀绿染色的蜡样芽孢杆菌芽孢 第3页/共22页 一、生物学特性（二）、培养特性 1、需氧，最适生长30—32℃. 2、在肉汤中混浊生长，有菌膜或壁环，振摇易乳化。 3、在普通琼脂平板上，菌落灰白色,不透明，边缘不整齐，表面粗糙，呈毛玻璃状或白蜡状。 第4页/共22页 4、在血平板上，菌落呈浅灰色，不透明，似白色毛玻璃状，有溶血环。 5、在甘露醇卵黄多粘菌素平板上，菌落呈粉红色（表示不发酵甘露醇）,周围有粉红色的晕（表示产生卵磷脂酶）一、生物学特性第5页/共22页 （三）、生化反应1、能分解GLU，麦芽糖，蔗糖，水杨苷，产酸不产气。 2、不分解乳糖，甘露醇，阿拉伯糖，山梨醇，木糖 3、H2S（-），尿素酶试验（-）卵磷脂酶（+），V—P试验（+），液化明胶，胨化中乳。第6页/共22页 （三）、生化反应 ?麦芽糖：阳性第7页/共22页 （三）、生化反应 ?甘露醇：阴性第8页/共22页 （三）、生化反应 ?木糖：阴性第9页/共22页 （三）、生化反应 ?尿素酶试验：阴性未接种接种第10页/共22页 （四）、抵抗力1、耐热； 2、对抗菌素的敏感性。 第11页/共22页 二、流行病学（一）、细菌分布 蜡样芽胞杆菌在自然界分布广泛，常存在于土壤、灰尘和污水中，植物和许多生熟食品中常见。已从多种食品中分离出该菌，包括肉、乳制品、蔬菜、鱼、土豆、糊、酱油、布丁、炒米饭以及各种甜点等。 在美国，炒米饭是引发蜡样芽胞杆菌呕吐型食物中毒的主要原因；在欧洲大都由甜点、肉饼、色拉和奶、肉类食品引起；在我国主要与受污染的米饭或淀粉类制品有关。第12页/共22页 二、流行病学 （一）、细菌分布 以前调查各种食品514件，发现本菌：日本1641件中有193件阳性，阳性率11.8%；国内480件中有221件阳性，阳性率46%；乳制品阳性率77%；水果、干果阳性率8.1%；肉制品阳性率26%。 第13页/共22页 （二）蜡样芽胞杆菌的食物中毒的一般情况1、季节性强：（6—10月）夏秋季为高峰期 2、中毒发病率高：60%—100%，集团中爆发，与葡萄球菌相似 3、中毒与性别、年龄无关： 4、潜伏期长短与中毒症状相关： 呕吐症 0.5—5h，发病 腹泻 8h后 5、污染源：主要泥土，灰尘，通过昆虫，不洁用具，工作人员传播，原料也有.第14页/共22页 6、常见中毒食品：乳类食品，肉类，米饭，淀粉类食品，甜点心，凉拌蔬菜，水果，色拉。 国内：与淀粉质食品相关多， 7、临床症状： （1）呕吐型 （2）腹泻型（二）蜡样芽胞杆菌的食物中毒的一般情况第15页/共22页 三、微生物检验 （一）检验程序 第16页/共22页 检样 稀释处理镜检 平板分离菌落计数 培养特性观察 报告结果 生化试验 证实试验 第17页/共22页 三、微生物检验（二）操作步骤： 1、菌数测定 以无菌操作将检样25g(ml),用灭菌生理盐水或磷酸盐缓冲液做成10-1—10-5的稀释液。取各稀释液0.1ml，接种在两个选择性培养基—甘露醇卵黄多孢菌素（MYP）琼脂培养基上，用L形涂棒涂布于整个表面，置36+-1恒温箱培养 12-20h后选取适当菌落数的平板进行计数，蜡样芽胞杆菌在此培养基上的菌落为粉红色（表示不发酵甘露醇），周围有粉红色的晕（表示产生卵磷脂酶）。计算后从中选取5个此种菌落做证实试验。 第18页/共22页 三、微生物检验 操作步骤： 2、分离试验 取检样或稀释液划线分离培养于选择性培养基（MYP）上，置37度培养12-20h，挑取可疑的蜡状芽胞杆菌菌落接种于肉汤和营养琼脂作成纯培养，然后做证实试验。 3、证实试验 （1）镜检观察形态 （2）培养特性 （3）生化性状及分型 第19页/共22页 三、微生物检验 ?（三）结果报告 根据证实为蜡状芽胞杆菌的菌落数计算出该平板上的菌落数，然后乘以稀释倍数，即得每g(ml)样品中所含蜡状芽孢杆菌数。如MYP平板上的可以菌落为25个，取5个鉴定，证实为四个，乘上稀释倍数（104），再乘上1g(ml)检样数（取的是0.1ml样)，则N=25*4/5*104*10=2*106 报告每个g(ml)检样中含蜡状芽胞杆菌的数量（个/个g(ml))第20