免疫测定方法学和临床应用优秀课件.ppt

第三代抗-HCV检测系统 核心区抗原比例相对下降,而相应也增加了NS3区C33C的比例,优化了试剂盒的组装工艺； 利用现代基因重组技术,对一些重要抗原采用更好的表达、纯化系统,利用先进的生产工艺、使包被抗原的活性更强,增加了检测的灵敏度,减少了非特异性反应； 加入了NS5区抗原。 丙肝病毒抗体 * 第三十页，共四十九页，2022年，8月28日 目前我国多采用第三代抗-HCV ELISA试剂,其敏感性超过99%,虽然目前缺乏判断其敏感性的金标准,但对于免疫功能正常的HCV RNA阳性感染者,抗-HCV检出率也高于99%。 丙肝病毒抗体 * 第三十一页，共四十九页，2022年，8月28日 补充/确认实验:重组免疫印迹 (RIBA) 检测原理：以待测血清中的HCV抗体和分别固定在硝酸纤维素膜、醋酸纤维素膜、尼龙膜等载体上的不同HCV抗原之间的特异性结合反应为基础,测定待测样品中抗-HCV的存在和有无。 丙肝病毒抗体 * 第三十二页，共四十九页，2022年，8月28日 因为HCV的各种抗原分别被单独固化在载体的不同位置上,因此,该项检测可以区分待测样品对HCV不同抗原的不同反应。 目前RIBA HCV已经得到FDA的认可,成为抗-HCV确认的标准。 临床意义：RIBA阳性的患者中75-80%为病毒血症(HCV RNA);RIBA阳性而血清中没有HCV RNA时提示可能为既往感染。 丙肝病毒抗体 * 第三十三页，共四十九页，2022年，8月28日 实时荧光监测PCR 检测原理：在PCR扩增反应管内加入了标记有两种染料的针对靶序列的探针,每当一次扩增反应中一条探针与靶序列退火结合后,整个反应体系就会增加一个单位的荧光.从而得出每一次扩增循环结束后产物的量. 丙肝病毒抗体 * 第三十四页，共四十九页，2022年，8月28日 临床意义： 特异性强：抗-HCV阳性并不能代表现症感染,丙型肝炎的诊断标准是HCV-RNA. 敏感性高：可发现抗-HCV阴性者HCV感染. 阳性出现早：在“窗口期”没有抗-HCV产生,但可检测出RNA. 可指导用药：为疗效观察及预后判断提供指标. 丙肝病毒抗体 * 第三十五页，共四十九页，2022年，8月28日 与HBV DNA相比，HCV RNA检测更为复杂和困难,检出率低: 血清中病毒含量低,且有一定波动,呈间歇阳性; 易被RNA酶降解; HCV RNA受进食的影响,HCV易与血中脂质及脂蛋白结合,致使其检出率降低; 二次PCR,其中任何步骤的问题均易影响其检出。 丙肝病毒抗体 * 第三十六页，共四十九页，2022年，8月28日 应用EIA S/CO比值报告抗-HCV结果 试剂 Ortho 3.0 华大吉比爱 金伟凯 华美 科化 英科新创 万泰 S/CO比值 ≥ 3.8 ≥ 7.0 ≥ 10.0 ≥ 6.0 ≥ 10.0 ≥ 8.6 ≥ 10.0 阳性预测值 ≥ 96.1% ≥ 96.1% ≥ 96.1% ≥ 97.3% ≥ 96.0% ≥ 96.1% ≥ 96.0% 任芙蓉,等. 中华肝脏病杂志, 2005,13:255-258 丙肝病毒抗体 * 第三十七页，共四十九页，2022年，8月28日 * 第一页，共四十九页，2022年，8月28日 免疫分析技术简介 乙肝病毒标志物定性、定量检测常见问题 抗HCV检测问题 ANA.ENA检测问题 TP-Ab检测问题 TB-Ab检测问题 免疫测定方法学临床应用 * 第二页，共四十九页，2022年，8月28日 免疫分析技术 早期的免疫分析技术: 免疫扩散、免疫电泳、直接及间接血凝、被动血凝、补体结合实验 特点:这些检测方法成本低、结果易于判断、技术上便于掌握,但不便于免疫检测自动化 后来的免疫分析技术: 放射性核素标记、荧光免疫标记、酶免疫标记、稀土元素标记及化学发光分子标记 特点:快速、灵敏、特异、易于测定等实验室的免疫检测自动化奠定了基础 * 第三页，共四十九页，2022年，8月28日 待测物质浓度与检测手段 临床化学分析 10 -12 10 -9 10 -6 10 -3 10 -0 pg/mL ng/mL mg/mL mg/mL g/L 免疫分析 Therapeutic Drugs Thyroid Hormone Fertility Hormone Allergy Cancer Markers Infectious Disease Vitamins Serum Proteins 免疫分析技术 * 第四页，共四十九页，2022年，8月28日 放射免疫的创立 1959 美国Yalow Berson 1960 英国 Ekim’s 1977 获诺贝尔医