细菌分离培养接种技术及生化.ppt

2. 吲哚试验(Indole Test) 原理： 色氨酸 吲哚 + 丙酮酸 吲哚+吲哚试剂(对二甲氨基苯甲醛) →玫瑰吲哚 培养基：蛋白胨水 方法：将待测菌接种于上述培养基中， 35℃ 24~48h，加入吲哚试剂，观察结果 结果：于两者液面交界处出现红色为阳性， 不变色为阴性。 应用：主要用于肠杆菌科细菌的鉴别，如大肠埃希菌为(+)，产气肠杆菌(-)。 色氨酸酶 某些细菌 第二十九页，共四十二页，2022年，8月28日 3. 硫化氢试验 原理：某些细菌能分解培养基中的含硫氨基酸产生H2S，当它与培养基中的Fe2+或铅离子相遇时，则形成黑褐色的FeS或PbS沉淀。此试验可间接用于检测是否产生H2S。 培养基：醋酸铁(铅)培养基。 方法：将待测菌接种于醋酸铁(铅)培养基中， 35℃培养1~2天，观察结果。 结果：培养基变黑为阳性，不变色为阴性。 应用：主要用于肠杆菌科中细菌属和种的鉴别。沙门菌属、爱德华菌属、亚利桑那菌属、枸橼酸杆菌属，绝大多数为阳性，其他菌属为阴性。 第三十页，共四十二页，2022年，8月28日 第一页，共四十二页，2022年，8月28日 一、培养基的种类和选择(一)基本条件 1.合格的细菌实验室 2.合格的无菌实验室 3.基本设备和器具 第二页，共四十二页，2022年，8月28日 (二)培养基 培养基(culture medium)是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养物制品。 用途： ①可用于细菌的分离纯化、传代和菌种保存 ②可用于研究细菌的生理生化特性 ③是对病原菌分离鉴定的主要环节和必不可少的手段 第三页，共四十二页，2022年，8月28日 1.培养基的组成成分： ⑴营养物质：水、蛋白胨、肉浸液、牛肉膏、糖醇类、血液、无机盐、鸡蛋和动物血清、生长因子（Vit、aa、嘌呤、嘧啶等）。 第四页，共四十二页，2022年，8月28日 ⑵凝固物质： 最常用的为琼脂(agar)，它是从石花菜中提出来的一种半乳糖胶，100℃溶解，40℃凝固，可利用琼脂来改变培养基的物理性状(固体或半固体)，它是理想的固体培养基的赋形剂，其本身不被细菌分解利用，也无营养作用。 第五页，共四十二页，2022年，8月28日 ⑶抑菌剂和指示剂： 不是细菌生长繁殖的必需物质，是制备细菌的选择、鉴别培养基和判断结果的需要。 常用的抑菌剂有：胆盐、煌绿、亚硫酸钠、亚硒酸钠及一些染料和某些抗生素等。 常用的指示剂有：酚红、中性红、甲基红、溴甲酚紫、溴麝香草酚蓝、中国兰等酸碱指示剂，美兰为常用的氧化还原指示剂。 第六页，共四十二页，2022年，8月28日 2.培养基的分类 液体培养基：牛肉汤 (牛肉浸液+1%蛋白胨 +0.5%NaCl pH7.4) 半固体培养基：加0.2~0.5% agar 固体培养基： 营养物+ 2% agar 按物理性状 第七页，共四十二页，2022年，8月28日 基础培养基：是其他培养基的基础，如普通肉汤、 普通琼脂平板、斜面、高层 营养培养基：BAP、罗-琴培养基、吕氏血清斜面 选择培养基：SS平板、BS平板、Mac平板等 鉴别培养基：糖发酵管、MIU、KIA、TSI等 特殊培养基：厌氧培养基、高渗培养基等 按用途 第八页，共四十二页，2022年，8月28日 3.常用培养基的制备 ⑴肉膏汤的制备： 0.3%牛肉浸膏 + 1%蛋白胨 + 0.5%NaCl加热溶解，调pH 7.4~7.6，分装，121℃，20分钟高压灭菌冷后待用。可用于标本和细菌的增菌。 ⑵普通琼脂平板、斜面、高层： 肉膏汤 + 2%agar，加热溶解， 121℃，20分钟高压灭菌冷至50℃ 平皿→ 普通琼脂平板：分离纯培养和药敏 倾倒 试管(斜放)→普通琼脂斜面：增菌、保存细菌 试管(直立)→普通琼脂高层：备用 第九页，共四十二页，2022年，8月28日 ⑶血琼脂平板： 普通琼脂平板营养物质灭菌冷至50℃ + 5%~10%脱纤维SRbc或RRbc，摇匀，倾倒无菌平皿，冷凝后即成血平板