实验三酶学实验.pptxVIP

实验三酶学实验;实验内容;实验十四 pH值对酶促反应速度的影响;【实验原理】;铁氰化钾;【实验试剂】;【实验方法】;2．立即混匀，置于37℃水浴中，保温15 min。 3．保温结束，各管分别加0.2mol/l NaOH 1 ml 终止反应。 4．各管分别加入1.0 ml 0.3% 4-氨基安替比林和2.0 ml 0.5% 铁氰化钾溶液，充分混匀，放置10 min，肉眼观察，比较各管颜色之深浅，用+ → ++++表示，观察哪一pH值下酶活性最强。;实验十五 温度对酶促反应速度的影响 ;【实验原理】;（1）0.1mol/L pH10 碳酸缓冲液 （2）0.04mol/L 基质液 （3）酶液 （4） 0.3% 4-氨基安替比林 （5） 0.5%铁氰化钾溶液 ;【实验方法】;2．保温结束后，立即加入1 ml 0.2 mol/l NaOH 终止反应。 3．各管再分别加入0.3% 4-氨基安替比林1.0 ml及0.5%铁氰化钾溶液2.0 ml，充分混匀，室温下放置10 min， 4．肉眼观察，比较各管颜色之深浅，用+ → ++++表示，观察哪一温度下酶活性最强。;底物浓度对酶促反应速度的影响;【实验原理】 在温度、pH及酶浓度恒定的条件下，底物浓度对酶的催化作用有很大的影响。在一般情况下，当底物浓度很低时，酶促反应的速度（V）随底物浓度〔S〕的增加而迅速加快，但当底物浓度继续增加时，反应速度的增加率就比较小，当底物浓度增加到某种程度时，反应速度达到一个极限值（最大速度Vm）;;【实验内容与方法】 1.取试管6支，编号，按表操作;2. 加酶液后，各管立即混匀，记录时间，各管在37℃水浴中保温15min，保温结束，立即加入0.2mol/L NaOH 1.0mL以终止反应。 3．各管中分别加入0.3% 4-氨基安替比林1.0mL，0.5%铁氰化钾2.0mL，充分混匀，放置10min，以空白管为对照，于510nm波长处比色。 ;抑制剂对酶促反应速度的影响;【实验原理】 凡能降低酶的活性，甚至使酶完全丧失活性的物质，称为酶的抑制剂。 竞争性抑制剂的作用特点是使酶的Km值增大，但不影响酶促反应的最大速度Vm。 非竞争性抑制剂的作用特点是酶的Km值不变，但酶促反应的最大速度Vm降低。;【实验内容与方法】 ; 2．加酶液后各管立即混匀，记录时间，在37℃水浴中保温15min后，立即加入0.2mol/L NaOH 1.0mL以终止反应。 3．各管中分别加入0.3% 4-氨基安替比林1.0mL，0.5%铁氰化钾溶液2.0mL，充分混匀，室温放置10min。以空白管为对照，于510nm波长处比色。;感谢您的欣赏