实验显微观察计数和测量细胞.pptxVIP

实验显微观察计数和测量细胞;附录3 显微观察、计数和测量细胞 见选修一;教学目标 了解血球计数板的构造、计数原理和计数方法，用显微镜直接测定微生物细胞总数。;二、显微计数法;血球计数板是一种专门用于计算较大单细胞微生物的一种仪器。 计数时，常采用样方法。 ;（二）微生物细胞的显微直接计数法 1、视待测菌悬液浓度，加无菌水适量稀释（斜面一般稀释到10－2），以每小格的菌数可数为度。 2、取洁净的血球计数板一块，在计数区上盖上一块盖玻片。 3、将酵母菌悬液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘滴入一小滴，不宜过多，让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区，勿使气泡产生，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。;第7页/共14页;4、静置片刻，将血球计数板置载物台上夹稳，先在低倍镜下观察到计数区后，再转换高倍镜观察并计数。由于活细胞的折光率和水的折光率相近，观察时应适当关小孔径光阑并减弱光照的强度。 5、计数时若计数区是由16个中方格组成，按对角线方位，数左上、左下、右上、右下的4个中方格（即100小格）的菌数。 如果是25个中方格组成的计数区，除数上述四个中方格外，还需数中央1个中方格的菌数（即80个小格）。 如菌体位于中方格的双线上，计数时则数上线不数下线，数左线不数右线，以减少误差。;第9页/共14页;6、对于出芽的酵母菌，芽体达到母细胞大小一半时，即可作为两个菌体计算。每个样品重复计数2～3次，每次数值不应相差过大，否则应重新操作，求出每一个中方格中细胞平均数（N），按公式计算出每mL(g)菌悬液所含酵母菌细胞数量。 7、测数完毕，取下盖玻片，用水将血球计数板冲洗干净，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免损坏网格刻度。洗净后自行晾干或用吹风机吹干，放入盒内保存。;第11页/共14页;;计算公式;感谢您的欣赏