浅谈毛状根及在药用植物中的应用.pptxVIP

浅谈毛状根及在药用植物中的应用第1页/共32页 主要内容3毛状根简介及特点 形成过程及影响因素 培养技术的应用存在的问题及解决方法参考文献341235第2页/共32页 1.1毛状根简介 植物被发根农杆菌感染后，在伤口处就会形成不定根，不定根除菌后能迅速生长，并产生多个分枝，呈毛发状，该不定根又被称为毛状根。 第3页/共32页 因为它将发根农杆菌含有的Ri质粒中的T-DNA (T-DNA区含有植物生长素合成的基因，能使寄主细胞无限繁殖）片段整合到植物细胞的DNA上，就可以诱导出毛状根，从而建立起毛状根培养系统。第4页/共32页 Ri质粒是位于发根农杆菌染色体之外的独立 的双链环状DNA； 质粒大小一般在180～250kb之间； 有两个非常主要的功能区即转移区T-DNA 区(即TL-DNA和TR-DNA)和致病区Vir区；第5页/共32页 农杆碱型发根农杆菌的Ri质粒物理结构第6页/共32页 毛状根技术VS愈伤组织和细胞悬浮培养 优点： 生长速度快 有许多分枝和根毛； 激素自养性 直接用于食品药品加工； 分化程度高 细胞分化而来，有遗传稳定； 有效成分多 借助基因工程，增加次生物含量； 大量培养易 向培养也释放代谢物。 1.2毛状根的特点第7页/共32页 2.1发根土壤杆菌诱导毛状根的过程①发根农杆菌识别受伤植物释放的诱导物。 ②发根农杆菌识别信号分子后，向受伤细胞作趋化性 运动，并与宿主细胞发生粘接。③ Ri质粒的vir区基因被乙酰丁香酮等物质括化，使Ri 质粒上的T-DNA片段被切割下来并转入植物细胞。④T-DNA基因进入寄主细胞的细胞核并整合到核基因 组中，然后在寄主细胞中表达。 第8页/共32页 对于不同的药用植物,影响其毛状根形成的因素不尽相同,可以通过试验来确定Ri质粒转化及毛状根诱导的最佳条件。 2.2影响毛状根形成的因素第9页/共32页 影响毛状根形成的因素外植体类 型 影响毛状根形成的因素影响毛状根形成的因素影响毛状根形成的因素影响毛状根形成的因素影响毛状根形成的因素影响毛状根形成的因素影响毛状根形成的因素植物的种 类影响毛状根形成的因素影响毛状根形成的因素影响毛状根形成的因素影响毛状根形成的因素影响毛状根形成的因素遗传转化过程 预培养时间 外源诱导物 菌株的类型 影响毛状根形成的因素 影响毛状根形成的因素植物生长物质 第10页/共32页 毛状根转化成功的植物以双子叶植物为多；发根农杆菌侵染绝大多数的双子叶植物、少数单子叶植物及个别裸子植物；已经成功诱导的个别单子叶植物如小麦、玉米、等。 植物的种类第11页/共32页 外植体的类型目前已从植物的叶片、茎、子叶、愈伤组织、下胚轴、根等多种类型的外植体上成功诱导出毛状根；同一植物上不同类型的外植体诱发毛状根的频率不同；不同植物上相同类型的外植体诱发毛状根的频率也不同；诱导过程，一般采用的都是较幼嫩的组织，因这些细胞处于旺盛的分裂状态，容易接受外源DNA。 第12页/共32页 菌株类型目前采用的发根农杆菌主要有天然农杆碱A4、ATCC15834、16834、LBA9402及1601、R1000、R1200等； 黄瓜碱型的2635、2657、2659等；甘露碱型的 5196、TR101、TR7等；每一种菌株对不同植物诱导毛状根的能力是不同的。 第13页/共32页 预培养时间外植体经预培养后能够促进细胞分裂；一般认为，分裂的细胞更容易整合外源DNA；另外，预培养提高外源基因的瞬时表达和转化率 ，还能对外植体起到驯化的作用，使其适应于离体培养的条件。 第14页/共32页 遗传转化过程 遗传转化一般包括预培养、浸菌和共培养这三个过程，每个过程的处理都会对遗传转化率有影响。预培养的时间过长，不利于农杆菌的侵入； 浸菌时间过长，对外植体造成较大的伤害不利于后期的分化。共培养时间过长，农杆菌的生长就会过度，植物细胞会因受到毒害而死亡。 第15页/共32页 外源诱导物农杆菌在侵染过程中，其基因受植物细胞释放的酚类物质的刺激而活化，从而提高对植物细胞的侵染力。乙酰丁香酮(AS)等酚类物质在农杆菌介导的单子叶植物中已被广泛应用来提高转化率，在一些双子叶植物中也被证实可以提高转化率。 第16页/共32页 植物生长物质在预培养和（或)共培养阶段添加一定量的植物生长物质，对毛状根的诱导也有一定影响 ；李雅丽研究不同浓度IBA的共培养培养基对蒙古黄芪毛状根诱导率的影响,发现使用MS+IBA（0.3mg/L）毛状根诱导率最高。 王冲之等在共培养阶段考查了不同激素配比对西洋参毛状根诱导率的影响，惟有 MS+NAA(6mg/L)可产生毛状根。