一种基于pCAG-flox-neo载体的高效稳定的定点整合基因敲入方法.pdfVIP

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2023-05-09 发布于北京
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一种基于pCAG-flox-neo载体的高效稳定的定点整合基因敲入方法.pdf

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本发明提供了一种基于pCAG‑flox‑neo载体的高效稳定的定点整合基因敲入方法，具体步骤如下：(1)将pCAG‑STOP2载体双酶切；将合成的片段经连接至pCAG‑STOP2载体；(2)将合成的载体再次酶切后连入polyA‑loxP得到pCAG‑flox‑neo载体；(3)将能够被sgRNA识别的猪pH11位点的sgRNA序列以及PAM序列插入到T3promoter后，得到最终的基因敲入载体骨架pCAG‑floxP‑neo‑pH11；(4)将所需要的hKCNH2‑T618I及hmuPKD2

(19)国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 114480457 A (43)申请公布日 2022.05.13 (21)申请号 202111568113.8 (22)申请日 2021.12.21 (71)申请人浙江大学地址 310030 浙