微生物培养基的配制.pptxVIP

微生物培养基的配制第1页/共13页 一、培养基：为人工培养微生物而制备的、提供适合微生物生长、繁殖或积累代谢产物的营养基质。第2页/共13页 二、培养基配制原则：（1）目的要明确：根据微生物的种类、培养目的等确定配制培养基的种类，因为不同的微生物对培养物质的需求不同。 （2）营养要协调：注意各种营养物质的浓度和比例。 （3）pH要适宜：各种微生物适宜生长的pH范围不同。 细菌pH为：6.5-7.5； 放线菌pH为：7.5-8.5； 真菌pH为：5.0-6.0。第3页/共13页 ☆ 微生物正常代谢过程中pH会不会改变？ 如何维持培养基中pH的相对恒定？微生物在生长代谢过程中，由于营养物质的利用和代谢产物的形成，往往会改变环境中的pH。可在培养基中加入缓冲剂，最常用的缓冲剂是KHPO4/KH2PO4第4页/共13页 三、培养基的种类据组成成分可分为: 1.合成培养基：由各种纯化学物质按一定比例配制而成。 2.半合成培养基：有一部分纯化学物质和另一部分天然物质配制而成。 3.天然培养基：利用天然来源的有机物配制而成。从培养基的物理状态可分为 1.液体培养基：不加凝固剂的液体状态培养基。 2.固体培养基：在液体培养基中加入2%左右的凝固剂的固体状态的培养基或农副产品培养基。 3.半固体培养基：在液体培养基中加入0.2～0.5%凝固剂而成的半固体状培养基。第5页/共13页 天然培养基——是用化学成分并不十分清楚或化学成分不恒定的天然有机物质配制而成培养基。常用的有机物有牛肉膏、酵母膏、蛋白胨、麦芽汁、豆芽汁、玉米粉、麸皮、牛奶、血清等。如实验室常用于培养细菌的牛肉膏蛋白胨培养基，及培养酵母菌的麦芽汁培养基等就属于此类培养基。第6页/共13页 按用途不同分为：1．基础培养基:含有一般细菌生长繁殖需要的基本的营养物质。最常用的基础培养基是上面提及的天然培养基中的牛肉膏蛋白胨培养基。2．营养培养基（加富培养基）:在基础培养基中加入某些特殊营养物质，如血液、血清、酵母浸膏或生长因子等。用以培养对营养要求高的微生物，如培养百日咳杆菌需要含有血液的培养基。在研究致病微生物时常采用加富培养基。第7页/共13页 3．鉴别培养基:是一类含有某种特定化合物或试剂的培养基。主要用于不同类型微生物的快速鉴定，如糖发酵管。4．选择培养基:利用微生物对某种或某些化学物质的敏感性不同，在培养基中加入这类物质，抑制不需要的微生物生长，而利于所需分离的微生物生长，从而达到分离或鉴别某种微生物的目的，如分离真菌的马丁氏培养基。第8页/共13页 ☆ 选择培养基加入青霉素的培养基： 分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐的培养基： 分离金黄色葡萄球菌不加氮源的无氮培养基： 分离固氮菌不加含碳有机物的无碳培养基： 分离自养型微生物加入青霉素等抗生素的培养基： 分离导入的目的基因的受体细胞加入氨基嘌呤、次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷的培养基： 分离杂交瘤细胞第9页/共13页 四、培养基配制的一般程序称量：按照配方正确称取各种原料放于搪瓷杯中。溶化：在搪瓷杯中加入所需水量，玻棒搅匀，加热溶解。调pH值：用1N NaOH或1N HCl调pH，用pH试纸对照。加琼脂溶化：加热过程中要不断搅拌，可适当补水。过滤分装：注意不要污染棉塞。包扎成捆，挂上标签（必须用铅笔写），注明何种培养基。灭菌摆斜面检查：培养基灭菌后必须在370C下恒温培养24h，确定无菌生长，方可使用。按培养基配方称量加水加热熔化调节pH值过滤分装包装灭菌检查灭菌彻底与否第10页/共13页 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基（用于分离和培养细菌，是一种天然培养基）属基础培养基营养琼脂培养基是天然培养基，属基础培养基马铃薯（或豆芽汁）蔗糖（或葡萄糖）琼脂培养基（用于分离和培养真菌之用，是一种半合成培养基）选择性合成培养基。淀粉琼脂培养基（高氏一号Gause′1），用于分离和培养放线菌，是一种合成培养基。用于放线菌培养。选择性合成培养基。伊红美兰培养