生物化学教程蛋白质的性质.pptxVIP

生物化学教程蛋白质的性质;１、两性游离;２、蛋白质的等电点（pI）;几种蛋白质的等电点（pI）;３、电泳;电泳 蛋白质在等电点pH条件下，不发生电泳现象。利用蛋白质的电泳现象，可以将蛋白质进行分离纯化。;电泳方法：;（二）蛋白质的胶体性质与蛋白质的沉淀;蛋白质的胶体性质;透析;半透膜阻留pr分子，而让小的溶质分子和水通过，以达到除去蛋白质溶液中小分子（盐、低分子酸等）。;沉降作用;沉降作用;Svedberg单位的定义：;蛋白质的沉淀;3、沉淀方法：;①盐析法;②有机溶剂沉淀;③重金属盐沉淀　;④某些酸类沉淀　;一些常见的蛋白质沉淀剂;4、应用：;（三）蛋白质的变性;蛋白质的变性;（三）蛋白质的变性;介电常数;4、变性蛋白质的特征：;一些与食品相关的蛋白质的热变性温度/℃;蛋白质的变性程度较轻时，去除变性因素后，蛋白质恢复原有空间构象和生物活性的现象称为复性。;去除尿素，β-巯基乙醇;５、实际应用;蛋白质的凝固;（四）蛋白质的水解;检查蛋白质水解程度的方法：;与亚硝酸的反应;（五）蛋白质的颜色反应;1、双缩脲反应;1、双缩脲反应;1、双缩脲反应;2、与水合茚三酮的反应;3、蛋白质黄色反应;4、米伦氏反应;5、乙醛酸反应;6、酚试剂（福林试剂）反应;蛋白质的颜色反应;蛋白质的颜色反应;蛋白质的紫外吸收;色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸的紫外吸收光谱;蛋白质的别构作用;第50页/共87页;酶的别构效应;别构酶;第六节 蛋白质的提取、分离纯化和测定;细胞的破碎：;细胞破碎;蛋白质的分离纯化和鉴定;提取;理想的提取溶剂应具备下述条件：;一般用缓冲液保持pH。可溶蛋白常用稀盐提取，如0.1Mol/L NaCl。脂蛋白可用有机溶剂提取，不溶蛋白用稀碱处理。提取的原则是少量多次。要注意防止植物细胞液泡中的代谢物改变pH，可加入碱中和。 为防止酚类氧化可加5mMol/L维生素C。 加入－SH基的保护剂，防其被氧化。 加碘乙酸可抑制蛋白酶活力，防止蛋白被水解。 加入EDTA，防重金属对蛋白质的破坏。 低温操作。; 搅拌;粗提 ;分离;核酸沉淀剂：MnCl2、硫酸鱼精蛋白、链霉素、核酸酶等。 蛋白沉淀剂：醋酸铅、单宁酸、SDS等，也可除多糖，沉淀后应迅??盐析除去沉淀剂，以免目的蛋白变性。 选择变性：用加热、调节pH或变性剂选择性地变性杂蛋白。如提取胰蛋白酶或细胞色素C时，因其稳定性高，可用2.5％三氯乙酸处理，使杂蛋白变性沉淀。;分级法;盐析后样品中含大量盐类，用透析除去。也可用分子筛，如Saphadex G25层析除盐。如样品过稀，可用冻干、超滤等方法浓缩。 ;精制 ;纯化;第68页/共87页;第69页/共87页;第70页/共87页;第71页/共87页;鉴定;参考书：;实验:酸性磷酸脂酶的分离、纯化 操作步骤;实验:酸性磷酸脂酶的分离、纯化 操作步骤;【目标测试】;问题;问题;问题;思考题;血浆脂蛋白;４、组成特点及功能：;教学资源;一、蛋白质的功能多样性;Edman （苯异硫氰酸酯法）氨基酸顺序分析法实际上也是一种N-端分析法。此法的特点是能够不断重复循环，将肽链N-端氨基酸残基逐一进行标记和解离。 ;第86页/共87页;感谢观看！