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基因工程111工具酶;;基因克隆与表达;一 基因工程的基本元件 ------工具酶; 第一节 限制性内切酶
定义:能够识别和切割双链DNA(dsDNA)分子内特异核苷酸 顺序的核酸内切酶,叫做限制性核酸内切酶.;一、II型限制性内切酶切割类型;2.1 产生5’粘性末端 ;第8页/共39页;同尾酶
这一类的限制酶来源各异,识别的靶序列也不相同,但产生相同的粘性末端。;酶的星号活性
当酶切条件改变时,酶的专一性可能会降低,以至于同一种酶可识别和切割多个的位点。;双酶切方法;三、限制性内切酶分析方法;;;;;DNA连接酶 ;二、DNA连接酶的连接范围 ;三、DNA连接酶的连接条件 ;五、T4 DNA连接酶的反应条件;DNA聚合酶的特点:
1.以四种脱氧核糖核苷酸为底物
2.需模板DNA;
3.需引物;
4.新链的合成方向为5’-3’;三、DNA聚合酶的活性;四、Klenow酶;2.Klenow酶的三维结构;;;五、DNA聚合酶的应用 ;5.1 来源:
水生栖热菌(Thermusaquaticus)yT1
5.2 活性:
聚合最适温度为75-80℃,
不具3’→5’外切酶活性,
具5’→3’外切活性 。;反转录酶(reverse transcriptase) ;①依赖RNA的DNA聚合酶活性 ;三、用途;一、单链核酸酶(S1/ Bal31 Nuclease) ;2.Bal31单链核酸酶的用途 ;第34页/共39页;末端转移酶;①ssDNA 3’-OH加尾 ;三、碱性磷酸酶与磷酸激酶;OH;谢谢观看!
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