土壤中分解尿素的细菌分离和计数.pptxVIP

土壤中分解尿素的细菌分离和计数;课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数;;课题目的;思考：PCR技术要求使用耐高温的DNA聚合酶，这种酶要能忍受93 ℃左右的高温。如果请你来寻找这种耐高温的酶，你会去哪里寻找？(　　) A．土壤中　　 B．海水中　　 C．热泉中　　 D．冷库中;1、自然界中目的菌株的刷选原理： ; KH2PO4 1.4g NaHPO4 2.1g MgSO4 H2O 0.2g 葡萄糖 10.0g 尿素 1.0g 琼脂 15.0g 将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL。 ;3、方法：;(2)改变培养基中的营养成分。;本课题使用的培养基的配方如下：;二、统计菌落数目; 例：两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。从对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下两种统计结果。 1、甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230。 2、乙同学在该浓度下涂布了A、B、C三个平板，统计的菌落数分别为21、212、256，该同学以这三个平板上菌落数的平均值163作为统计结果。 你认为这两位同学的作法正确吗？如果有问题，错在哪？; 用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，正确的是(　　) A．涂布了一个平板，统计的菌落数是230 B．涂布了两个平板，统计的菌落数是215和260，取平均值238 C．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是21、212和256，取平均值163 D．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是210、240和250，取平均值233;因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上 观察到的只是一个菌落。 因此统计结果一般用菌落数表示。;显微镜直接计数 ;1 、产生标准形态菌落的细菌的最初数目和培养基分别是（ ） A 一个细菌、液体培养基 B 许多细菌、液体培养基 C 一个细菌、固体培养基 D 许多细菌、固体培养基 2、某同学在稀释倍数为106 的培养基上测得平板上的菌落数 的平均值为215，那么每毫升样品中菌落数是（涂布平板时所用 稀释液的体积为0.1ml） A 2.15×108 B 2.15×109 C 215 D 21.5 3、下列有关检测土壤中细菌总数实验操???的叙述中， 不正确的是（ ） A 用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨，高温、高压灭菌后道平板 B 取104、105、106 倍土壤稀释液和无菌水各0.1ml涂布不同平板 C 将实验组和对照组平板倒置，37℃恒温培养24h-48h D 确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的平板进行计数。; 利用选择培养基进行尿素分解菌的分离过程中，从对应稀释倍数为106的培养基中，A、B两同学分别得到以下两种统计结果。 1、A同学筛选出150个菌落。 2、B同学筛选出50个菌落。 B认为A的培养基被杂菌污染了，或培养基中混入了其他含氮物质，因而导致不能分解尿素的细菌也能在该培养基中生长。A确认自己的操作无误，但也拿不出能令人信服的证据。 请你帮助A同学改进实验，提供具有说明了的证据。;2、增加实验说服力的措施：;若牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数大于选择培养基上的数目，说明：;距地表约3～8cm土壤层;测细菌数： 测放线菌： 测真菌数：;1 、关于土壤取样的叙述，错误的是（ ） A 土壤取样，应选取肥沃、湿润的土壤 B 先铲去表层土3-8cm左右，再取样 C 取样用的小铁铲和信封在使用前不用灭菌 D 应在火焰旁称取土壤 2、下列关于“土壤中分解尿素的细菌的分离”实验步骤排列 正确的是 ①土壤取样 ②称取10g土壤加入盛有90ml无菌水的锥形瓶中 ③吸取0.1ml进行平板涂布 ④依次稀释至101、102、103、104、105、106、107 稀释度 A①②③④ B①③②④ C①②④③ D①④②③ ;（三）微生物的培养与观察 1、接种：用适当的稀释液涂布平板 2、培养：细菌：30～37℃，1～2d; 放线菌:25～28℃, 5～7d; 霉菌: 25～28℃, 3～4d. 3、观察：a.每24h统计一次菌落数目 b.以“稳定菌落”为观察对象