大肠菌群测定操作规程.doc

大肠菌群测定操作规程 文件编号 版次 第一版 共 1 页 第 1 页 拟制 审核 批准 生效日期 更改次数 文件标题 大肠菌群测定操作规程 一． 适用范围：大肠菌群系指一群在36?条件下培养48h能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧的革 兰氏阴性无芽孢杆菌。通常用此法作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量。 二． 操作内容： 1. 检验程序： 检样? 稀释 ? LST发酵管（36?1?，24?2h） ??不产气 ? 大肠菌群阴性 ? 报告 产气 ?BGLG（36?1?，48?2h） ? 不产气 ? 大肠菌群阴性 ? 报告 产气 ? 大肠菌群阳性 ? 报告 2. 操作方法： 2.1 以无菌操作，将检样10ml被测液放于含有90ml灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶 内预置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1：10的均匀稀释液。 2.2 用1ml 灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml 灭菌生理盐水或其他稀释液的 试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液），振摇试管，混合均匀，做成1：100的稀释液。（均 液的PH值应在6.5～７.5之间，必要时分别用1mol/L氢氧化钠（NaoH）或(1mol/L)盐酸（HCL） 调节。 2.3 另取1ml 灭菌吸管，按上条操作顺序，做10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支 1ml灭菌吸管。 2.4 根据食品卫生标准要求或对检污染情况的估计，选择三个稀释度，每个稀释度接种3管。 2.5 初发酵试验：将待检样品接种于月桂基硫盐胰蛋白胨发酵管内，接种量在1ml，每一稀释度接种3 管，置36?1?文箱内培养24?2h，观察倒管内是否有气泡产生，如未产气则继续培养至48h?2h. 记录在24h和48h内产气的LST肉汤管数。未产气者为大肠菌群阴性，产气者则进行复发酵试验。 2.6 复发酵试验 用按种环从所有48h?2h内发酵产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种于BGLB肉汤管中， 36?1?培养48h?2h，观察产气情况。产气者，计为大肠菌群阳性管。 2.8 报告：根据证实为大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表（见GB/T4789.3附表B），报告每100ml（g）大肠菌群的MPN值。