实验九过氧化氢酶CAT活性的测定.pptxVIP

实验九过氧化氢酶CAT活性的测定 第1页/共7页 材料与设备 实验材料: 海桐叶 实验器材：紫外分光光度计；离心机；研钵；0.5ml刻度吸管2支，2ml刻度吸管1支；10ml试管3支；恒温水浴； 试 剂： O.1mol/L过氧化氢；，0.1mo1/L磷酸缓冲液,pH7.0、 pH7.8 第2页/共7页 操作步骤： 1．称取植物材料0.3g，加入，0.1mo1/L磷酸缓冲液 (pH7.0) 6ml(分三次加入，最后两次用于洗研钵)，在研钵中研磨成匀浆，以 6000r／min 离心15分钟，倾出上清液(即为粗酶液)。 第3页/共7页 操作步骤： 2.测定：取10ml试管１支，按下表顺序加入试剂。 紫外吸收法测定H2O2样品液配置表 管  号 S1 粗酶液(ml) 0.2 pH7.8 PBS(ml) 1.5 蒸馏水(ml) 1.0 第4页/共7页 操作步骤： 3．测定 逐管加入0.3ml 0.1mol/L的H2O2，加完立即记时，并迅速倒入石英比色杯中，240nm下测定吸光度，每隔1min读数1次，共测2min，记录数据。 第5页/共7页 4.按下式计算酶活性。 结果计算：     以1min内A240减少0.1的酶量为1个酶活单位（u）。       过氧化氢酶活性(u/gFW/min)= 　　Vt—粗酶提取液总体积（ml）；     　  V1—测定用粗酶液体积（ml）；           FW—样品鲜重（g）； 0.1—A240每下降0.1为1个酶活单位（u）；           t—加过氧化氢到最后一次读数时间（min）。 第6页/共7页 感谢您的欣赏 第7页/共7页