一种镰孢菌基因组大片段敲除方法.pdfVIP

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2023-05-15 发布于四川
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一种镰孢菌基因组大片段敲除方法.pdf

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本发明公开一种镰孢菌基因组大片段敲除方法，步骤一、确定待敲除的靶标大片段并选择靶标位点，步骤二、同时表达两个sgRNA的CRISPR载体的获取，步骤三、donor载体的构建获取，步骤四、将CRISPR载体与donor载体导入镰孢菌体内，步骤五、对转化子分步筛选并提取基因组DNA，步骤六、设计PCR检测引物并筛选得到大片段敲除突变体；本发明技术组成简单、成本较低，并且能够通过剪切DNA双链导致菌体基因组受损，从而提高同源重组的效率，实现了对镰孢菌基因组大片段敲除的目的，促进镰孢菌的基础研究、代谢工

(19)国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 114717121 A (43)申请公布日 2022.07.08 (21)申请号 202210410044.6 C12N 15/66 (2006.01)