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基因抑制对细胞生长和增殖的影响 第1页/共15页 反义RNA 反义RNA是指与mRNA互补的RNA分子, 也包括与其它RNA互补的RNA分子。由于核糖体不能翻译双链的RNA，所以反义RNA与mRNA特异性的互补结合, 即抑制了该mRNA的翻译。 近年来通过人工合成反义RNA的基因, 并将其导入细胞内转录成反义RNA, 即能抑制某特定基因的表达,阻断该基因的功能, 有助于了解该基因对细胞生长和分化的作用。 第2页/共15页 结果与讨论 生长曲线的测定 血清依赖性实验结果 单细胞克隆形成率的比较 软琼脂集落形成比较 TdR 双阻断细胞后，流式细胞光度术（FCM）观察转染细胞周期的变化 Western blot检测转染细胞中周期相关基因的表达 第3页/共15页 引物设计 上游： 5’ ATG TTT GGG TAC CAC GGG CAC 3’ 631 gctcccgaga gagcatgttt gggtaccacg ggcacggccc ctccccgttc ctgcgcatca 下游： 5’ CCA GGA ATT CGA ATG TTT GTA 3’ Kpn I EcoR I 1261 ttccgtacct catctctcgg gcccagaccc tcaaggtaca aacattccct ttcctgggcc 第4页/共15页 pXJ41-as-POLD1重组质粒图谱 第5页/共15页 生长曲线的测定 第6页/共15页 转染细胞的血清依赖性实验 第7页/共15页 单细胞克隆形成率的比较 1: MCF -as-POLD1 2: MCF-7 3: MCF-pXJ41 第8页/共15页 软琼脂集落形成比较 1: MCF -as-POLD1 2: MCF-7 3: MCF-pXJ41 第9页/共15页 TdR 双阻断细胞后，流式细胞光度术（FCM）观察转染细胞周期的变化 　 　 Con 　 　 1 　 　 4 　 　 5 　 　 G1 S G2/M G1 S G2/M G1 S G2/M G1 S G2/M A 66.8 22.9 10.3 0.2 99.7 0.1 5.7 90.3 4.0 4.2 42.4 53.4 B 59.8 31.7 8.5 2.8 93.9 3.3 1.8 95.6 2.5 3.0 83.0 13.9 第10页/共15页 　 　 6 　 　 10 　 　 11 　 　 12 　 　 G1 S G2/M G1 S G2/M G1 S G2/M G1 S G2/M A 8.5 17.5 74.5 59.5 7.0 33.4 84.0 4.8 11.2 83.1 7.7 9.1 B 11.6 65.2 23.3 5.7 22.9 71.4 33.1 13.9 53.1 40.0 13.5 46.6 第11页/共15页 　 　 13 　 　 15 　 　 18 　 　 20 　 　 G1 S G2/M G1 S G2/M G1 S G2/M G1 S G2/M A 88.0 5.4 6.6 89.5 8.0 2.5 41.3 51.6 7.1 26.4 62.1 11.5 B 70.1 10.0 19.9 77.9 12.3 9.8 82.5 9.9 7.7 70.8 24.6 4.6 第12页/共15页 　 　 22 　 　 24 　 　 26 　 　 28 　 　 G1 S G2/M G1 S G2/M G1 S G2/M G1 S G2/M A 16.4 75.0 8.6 13.4 64.6 22.0 52.5 17.1 30.4 58.0 15.5 26.5 B 27.7 64.9 7.3 20.0 74.4 5.7 19.1 60.7 20.2 21.6 52.7 25.7 第13页/共15页 Western blot检测转染细胞中周期相关基因的表达 1 2 3 A: CyclinE B: CDK2 C: CyclinD1 D: CDK4 E:α－Tublin 1: MCF -as-POLD1 2: MCF-7 3: MCF-pXJ41 A B C D E 第14页/共15页 感谢观看！ 第15页/共15页