粮油检验 谷物中淀粉含量的测定 分光光度法-文本.pdf

粮油检验 谷物中淀粉含量的测定 分光光度法 1 范围 本文件规定了谷物中淀粉含量的检测方法。 本文件适用于谷物中淀粉含量的检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB 5009.3 食品安全国家标准 食品中水分的测定 GB/T 5491 粮食、油料检验 扦样、分样法 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 原理 耐热α-淀粉酶将淀粉水解为可溶性直链和支链麦芽糊精，淀粉葡萄糖苷酶将麦芽糊精水解成D-葡 萄糖，D-葡萄糖被氧化为D-葡萄糖酸脂，释放出H O ，再用过氧化氢酶催化进行显色反应，产生的醌亚 2 2 胺染料用比色法测定。 5 试剂和材料 除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的三级水。 试剂 5.1.1 冰醋酸（CH COOH）。 3 5.1.2 盐酸（HCL）。 5.1.3 无水乙醇（C H OH）。 2 5 5.1.4 氢氧化钠（NaOH）。 5.1.5 磷酸二氢钾（KH PO ）。 2 4 5.1.6 耐热α-淀粉酶：酶活力≥100 U/mL。 5.1.7 淀粉葡萄糖苷酶：酶活力≥3300 U/mL。 5.1.8 葡萄糖氧化酶：酶活力≥12000 U/g。 5.1.9 过氧化物酶：酶活力≥650 U/g。 5.1.10 4-氨基安替比林。 5.1.11 4-羟基苯甲酸。 注：本文件涉及的酶制剂均可由Megayme淀粉总量检测试剂盒提供。Megayme是安尔兰Megayme公司产品的商品名， 给出这一信息是为了方便本文件的使用者。如果还有其他产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 试剂配制 5.2.1 酶混合物缓冲液的配制：称取13.60 g 磷酸二氢钾、4.20 g 氢氧化钠和3.00 g 4-羟基苯甲酸， 溶于700 mL 水中，调节pH 至7.4，用水定容至1000 mL。 5.2.2 葡萄糖氧化酶-过氧化物酶-缓冲液混合物：称取葡萄糖氧化酶1.00 g、过氧化物酶1.00 g，4- 1 XX/T XXXXX 氨基安替比林80 mg，用酶混合物缓冲液溶解葡萄糖氧化酶-过氧化物酶混合物，并定容至1000 mL。该 混合试剂在4 ℃下保存2 个月，-20 ℃下可保存2 年。 5.2.3 80%乙醇溶液（4+1）：量取800 mL 无水乙醇与200 mL 水混匀。 5.2.4 氢氧化钠溶液（1 mol/L）：称取4.00 g 氢氧化钠，加水溶解并定容至100 mL，混合均匀。 5.2.5 醋酸钠缓冲液（100 mmol/L，pH 5.0）：取5.8 mL 冰醋酸于900 mL 水中，用1 mol/L 氢氧化 钠溶液调节pH 至5.0，用水定容至1 L，4 ℃保存2 个月。 标准品 D-无水葡萄糖（C H O ）纯度：≥98%。 6 12 6 标准溶液配制 1.000 mg/mL葡萄糖标准工作溶液：准确称取1.000 g经过98 ℃~ 100 ℃干燥2 h的D-无水葡萄糖, 加水溶解后加入5 mL盐酸,用水定容至1000 mL。此溶液每毫升相当于1.0 mg葡萄糖。 6 仪器和设备 分析天平：感量0.01 g、0.001 g、0.0001 g。 旋风磨：样品粉碎后可通过40 目筛网。 紫外可见分光光度计：配1 cm 比色皿。 恒温水浴锅：100 ℃±2 ℃、50 ℃±1 ℃。 涡旋混合器。 pH 计：精度±0.01。 离心机：转速不低于3000 r/min。 干燥箱。 移液器：量程